[发明专利]一种可大量筛选水稻苗期耐盐种质的方法

说明书

一种可大量筛选水稻苗期耐盐种质的方法，属于生物科学、农业科学技术领域，方法包括器材准备、浸种、播种、培养、盐处理和测定评价，整个过程全程在实验室培养的条件下，所用器材简单易得，实验周期短；可以根据样本容量的大小选择不同的测试指标，不仅可以研究地上部生长情况，还可以研究根系生长。若是大量样本筛选，可选择死叶率和死苗率等可快速测定的指标；本发明既可用于水稻耐盐种质资源筛选及耐盐QTL遗传解析、基因定位，也可广泛用于植物其他抗逆种质资源的筛选与评价，如抗高温、低温、耐重金属、抗干旱、耐缺素等，具有较好的社会和经济效益。

技术领域

本发明属于生物科学、农业科学技术领域，涉及一种水稻耐盐碱性的鉴定与评价方法，特别是涉及一种可大量筛选水稻苗期耐盐种质的方法。

背景技术

土壤盐碱化是制约农作物生长及产量的重要因素，目前全世界的盐碱地有1×10⁹hm²，约占农业用地的20％，仅仅在中国，盐碱地面积就达到1亿hm²。水稻是中度耐盐的作物，曾被作为盐碱地开发利用的先锋植物。但水稻在盐碱地种植一般都会减产，严重时甚至不能完成生活史。

耐盐性属于复杂的数量性状遗传，受多基因控制。对于水稻耐盐碱性的机理与分子机制，前人已经做了大量的研究，总结出了不同耐盐碱性的鉴定与评价方法，同时也筛选出了一些较好反映耐盐碱程度的相关指标。这为水稻耐盐种质的鉴定及耐盐相关性状的遗传机制研究奠定了基础。目前，从水稻中已克隆到一些耐盐基因，如SKC1、AVP1、TPP、DST、OsNHX1、OsCIPK15、转录因子OsDREB2A、NAC等。然而，由于这些基因多数是在过量表达或抑制表达情况下表现出较强的耐盐特性，其同时也严重影响到植株的农艺综合性状，因而其育种利用价值有限。育种实践中更关注那些蕴藏在耐盐种质中的耐盐基因/QTL，尽管当前已经定位到了较多的耐盐QTL，但迄今克隆的还很少。近年的初步研究显示，通过对多个耐盐基因/QTL聚合可进一步提高水稻耐盐性，选育更强耐盐性的水稻。利用分子标记构建高密度的遗传连锁图谱，对选择个体利用分子标记与目标基因分离或紧密连锁筛选优势基因，降低了连锁累赘，从而获得优良的目标个体，育种效率、准确度会大大地提高。因此，除了通过泡田洗盐、暗管排水等合理的水肥管理和化学、生物改良可以减轻对水稻的盐害之外，从现有资源中挖掘具有强耐盐碱能力的水稻种质，发掘其中的优良耐盐基因/QTL，进而通过常规育种与分子标记辅助选择相结合的方法，选育具有广泛适应性的水稻耐盐品种是当前及今后耐盐新品种选育的最主要方向与策略。

苗期是水稻整个生育周期中比较重要的时期，这个时期水稻对各种逆境条件相对比较敏感，如盐胁迫会使水稻幼苗生长受阻，叶片发黄甚至干枯，分蘖变少，根少且发黄，严重影响其生长发育及产量形成。因此，苗期耐盐性鉴定也是水稻耐盐性种质资源筛选的一个重要方面。如果一次性从大量种质资源中筛选耐盐种质，用传统的方法不仅需要大量的栽培器具及栽培空间，而且费时又费力。

发明内容

本发明的目的是为了克服传统筛选方法的不足，提出一种可大量筛选水稻苗期耐盐种质的方法，特别是在实验室培养的条件下，如何快速地筛选苗期耐盐水稻种质的方法。

本发明的技术方案是：一种可大量筛选水稻苗期耐盐种质的方法，其特征在于，包括如下操作步骤：

(1)器材准备：96孔去底PCR板、有机玻璃架、塑料周转箱；

(2)浸种：将水稻种子用H₂O₂溶液浸泡，清水冲洗几遍后再换清水继续浸种至48h；

(3)播种：选取饱满一致的待鉴定水稻种子，将种胚朝下放入PCR管中，一管一粒，PCR板放入周转箱内的有机玻璃架上，8个板/箱，加蒸馏水至接近种子的位置，PCR板上覆盖用蒸馏水浸湿的纱布，待种子长出根后移去纱布；