[发明专利]一种快速高效的钙卫蛋白检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种快速高效的钙卫蛋白检测试剂盒，包括相互独立的试剂R1和试剂R2，其特征在于，所述试剂R1包括：磷酸盐缓冲液50～150mmol/L；氯化钠11～15g/L；表面活性剂3～11g/L；牛血清蛋白5～12g/L；乙二醇聚氧乙烯醚80～100g/L；防腐剂3～6g/L；且所述试剂R1的pH值为6.3～7.5；

所述试剂R2包括：磷酸盐缓冲液80～120mmol/L；抗人钙卫蛋白抗体包被胶乳颗粒15～30mg/L；封闭剂20～50mg/L；氯化钠5～8g/L；牛血清蛋白3～8g/L；防腐剂4～6g/L；且所述试剂R2的pH值为7～8，其中，试剂R2中组分浓度为组分在试剂中的终浓度。

2.根据权利要求1所述的快速高效的钙卫蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1包括：磷酸盐缓冲液80～120mmol/L；氯化钠12～15g/L；表面活性剂5～8g/L；牛血清蛋白6～10g/L；乙二醇聚氧乙烯醚85～96g/L；防腐剂3～6g/L；且所述试剂R1的pH值为6.3～7.5；

所述试剂R2包括：磷酸盐缓冲液90～110mmol/L；抗人钙卫蛋白抗体包被胶乳颗粒18～25mg/L；封闭剂25～45mg/L；氯化钠5～8g/L；牛血清蛋白5～6g/L；防腐剂4～6g/L；且所述试剂R2的pH值为7～8，其中，试剂R2中组分浓度为组分在试剂中的终浓度。

3.根据权利要求2所述的快速高效的钙卫蛋白检测试剂盒，其特征在于，在试剂R2中，所述封闭剂包括明胶1～3wt％、NH₂-PEG 2～4wt％和壳聚糖1～5wt％，其余为磷酸盐缓冲液。

4.根据权利要求3所述的快速高效的钙卫蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述抗人钙卫蛋白抗体包被胶乳颗粒与所述封闭剂的浓度比为1:1.1～2.5。

5.根据权利要求1所述的快速高效的钙卫蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述防腐选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯中的至少一种。

6.根据权利要求1所述的快速高效的钙卫蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂选自Triton X-100、Tween-20、月桂醚、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚和聚氧乙烯辛基苯醚中的至少一种。

7.一种根据利要求1～6中任意一项所述的快速高效的钙卫蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)试剂R1的制备；

(2)试剂R2的制备：将聚苯乙烯乳胶微球用磷酸盐缓冲液稀释，然后加入氯化钠、牛血清蛋白、3-(N-吗啉)丙磺酸、N-羟基硫代琥珀酰亚胺、稀土离子和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐活化聚苯乙烯乳胶微球，超声分散30～60min，得到产物A；

将产物A均分为两份，即A1和A2，在产物A1中加入抗人钙卫蛋白抗体A，反应1～3h后，加入封闭剂，得到乳胶液C1；在产物A2中胶乳加入抗人钙卫蛋白抗体B，反应1～3h后，加入封闭剂，得到乳胶液C2；

分别对乳胶液C1和乳胶液C2进行离心，弃去上清液，分别得到沉淀物D1和沉淀物D2，接着将沉淀物D1和沉淀物D2分别溶于磷酸盐缓冲液中，得到钙卫蛋白抗体标记液E1和E2，接着将钙卫蛋白抗体标记液E1和E2进行混合，并加入防腐剂，即得到抗人钙卫蛋白抗体包被胶乳颗粒溶液。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述稀土离子选自Eu²⁺和Eu³⁺中的一种。

9.根据权利要求7所述的快速高效的钙卫蛋白检测试剂盒，所述聚苯乙烯胶乳的颗粒直径为100～300nm。