[发明专利]一种抗原固定化基质膜及包含其的用于检测自身免疫疾病相关抗核抗体谱的试剂盒及其用途

说明书

本发明公开了一种抗原固定化基质膜及包含其的用于检测自身免疫疾病相关抗核抗体谱的试剂盒及其用途。所述的抗原固定化基质膜包含但不仅包含以下22条彼此独立的抗原检测线，所述的抗原检测线由双链DNA、组蛋白、核糖体P0蛋白、PCNA、SmD1、SmD3、SmB/B’、snRNP‑A、snRNP‑C、snRNP68/70、SSA/Ro60、SSA/Ro52、SSB/La、Jo‑1、PL‑7、PL‑12、PmScl、Scl‑70、CENP‑A、CENP‑B、RA33以及PR3组成。利用包含该抗原固定化基质膜的试剂盒进行检测，能够同时检测22种自身免疫抗体，用以辅助诊断8种常见弥散性结缔组织病。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种抗原固定化基质膜及包含其的用于检测自身免疫疾病相关抗核抗体谱的试剂盒及其用途。

背景技术

自身免疫性疾病(Autoimmune Diseases)是由于机体免疫系统对自身存在的抗原发生免疫反应，进而导致自身器官组织损害的一类疾病。其发病过程涉及自身抗原的暴露、机体促炎症的微环境、先天免疫系统的激活、抗原呈递反应激活获得性免疫系统、T细胞的激活以及B细胞释放出大量抗自身抗体等等病理机制。随着免疫系统的层级紊乱和对释放自身抗原的组织或器官的进一步攻击和损害，最终导致器质性病变，亦即自身免疫性疾病的发生。

基于自身免疫类疾病的特殊病理机制可知，自身免疫反应的发生早于该疾病临床表征的出现。不同的自身免疫性疾病，致病性自身抗原的种类各异，故B细胞所产生的抗自身抗原的抗体也具有疾病特异性。因此，检测血液中的特异性自身抗体，就成为对自免类疾病进行风险预测、早期诊断的重要免疫学指标。

自身免疫性疾病可发作于人体的任何器官及组织。至今，已临床发现超过100种不同的自免类疾病。根据世界卫生组织(World Health Organization,WHO)的权威报道，自身免疫性疾病在人群中的发病率约占总人数的3-5％。在中国，罹患此类疾病的患者数目高达6000万人以上。自身免疫性疾病好发于女性和中老年人，其特点是起病缓慢，病程反复迁徙，反复发作，反复缓解，有的成为终生痼疾。

目前临床实验室使用的自身抗体免疫学检测方法包括免疫荧光法、酶联免疫吸附法和免疫印迹法，不同方法各有优劣。

免疫荧光法是使用具有完全自身抗原谱的人喉癌上皮细胞Hep-2或鼠肝或鼠肾的细胞冰冻切片为基质。加入血清检测时，血清中的自免抗体可特异性结合于天然抗原上，再通过荧光染色的方法提示自身抗体的存在，属于定性的检测方法。根据抗体所结合的自身抗原的亚细胞定位，其染色图谱可大致分为：均质核型、着丝点核型、核膜核型、核仁核型、斑点核型以及胞浆型六大类。

这种方法的优点是利用细胞所含的天然抗原进行自身抗体检测，抗原谱完全，且抗原结构均为天然构像，其检测的特异性最高。缺点是操作复杂，且定性结果判定具有主观性，可能因为疾病进程的不同、观察者的不同以及新老切片批次不同的差异而对染色结果释义存在差异。同时，该方法无法通过荧光图谱确定阳性自身抗体的具体种类，因此无法对不同种类的疾病进行特异性鉴别诊断。

酶联免疫吸附法是将某一特定种类的自身抗原吸附于酶标板上。孵育血清后，抗原与血清中自身抗体特异性结合，再通过酶联反应显色的一种定量检测手段。它具有灵敏度高、特异性强、操作方法简便、应用范围广等特点。同时，可针对单类自免抗体进行特异性定量检测，排除了诊断结果释义中的主观偏差。但是，单次酶联免疫测试只能检测单一的自免抗体，检测通量低成本高，在自身免疫性疾病的辅助诊断应用推广方面具有很大的局限性。

免疫印迹法是基于固相免疫测定技术的一种检测方法。其原理是通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)将HEP-2细胞裂解物进行电泳分离，进而确定不同的自身抗原在电泳图谱上的位置，再通过电转移的方式将完全抗原谱从凝胶转移至硝酸纤维膜或尼龙膜。孵育血清后，血清中的自身抗体与固相膜上的抗原进行特异性结合，再通过不同的信号检测方式，如碱性磷酸酶显色或化学发光等，对自免抗体进行半定量或定量检测。