[发明专利]一种自动合成多肽分子内二硫键的方法

权利要求书

1.一种自动合成多肽分子内二硫键的方法，其特征是，包括以下步骤：

（a）预先利用多肽固相合成技术获得含有目标多肽的肽树脂，其中，所述目标多肽的巯基应用Mmt保护基保护；所述目标多肽为催产素、精氨酸加压素或iRGD肽；被保护的催产素的氨基酸序列为：C(Mmt)YIQNC(Mmt)PLG-NH₂；被保护的精氨酸加压素的氨基酸序列为：C(Mmt)YFQNC(Mmt)PRG-NH₂；被保护的iRGD肽的氨基酸序列为：C(Mmt)RGDKGPDC(Mmt)-NH₂；

（b）将肽树脂置于多肽固相合成仪中，加入含有1vol%三氟乙酸的二氯甲烷溶液，反应30~200 min，以脱去巯基的Mmt保护基，反应结束后，分别用二氯甲烷和DMF进行洗涤；

（c）步骤（b）之后，加入DMF和[Pt(phen)(en)Cl₂]Cl₂溶液，反应2~4h，反应结束后，依次用体积比为1~5∶1的DMF/H₂O、DMF和乙醚溶液进行洗涤；

（d）将步骤（c）所得产物干燥后，在多肽自动切割仪上切割多肽，然后在得到的切割液中加入乙醚，经沉淀、过滤后，得到含有分子内二硫键的目标多肽。

2.根据权利要求1所述的自动合成多肽分子内二硫键的方法，其特征是，步骤（a）中，多肽固相合成所用的树脂为Fmoc-Rink-amide resin。

3.根据权利要求1所述的自动合成多肽分子内二硫键的方法，其特征是，步骤（c）中，加入的DMF和[Pt(phen)(en)Cl₂]Cl₂溶液的体积比为5~20∶1，所述[Pt(phen)(en)Cl₂]Cl₂溶液的浓度为0.05 mol/L。

4.根据权利要求1所述的自动合成多肽分子内二硫键的方法，其特征是，步骤（c）中，[Pt(phen)(en)Cl₂]Cl₂的用量与目标多肽的摩尔比为1.5~2.0∶1。

5.根据权利要求1所述的自动合成多肽分子内二硫键的方法，其特征是，步骤（d）中，切割所用试剂为：6vol%的水、 2vol%的三异丙基硅烷和92vol%的三氟乙酸。