[发明专利]一种检测肌红蛋白的核酸适配体荧光传感器及其构建方法

说明书

本发明公开了一种检测肌红蛋白的核酸适配体荧光传感器及其构建方法，属于分析检测技术领域。所述构建方法，包括：将修饰有淬灭基团的肌红蛋白核酸适配体和修饰有荧光基团的核酸适配体互补链加入缓冲体系中杂交，制得所述的核酸适配体荧光传感器。当加入肌红蛋白，核酸适配体与互补短链分离，与肌红蛋白结合，连有荧光基团的互补短链脱离连有淬灭基团的核酸适配体后，荧光基团的荧光得到恢复，其荧光恢复的强度与肌红蛋白的浓度成正比，由此可测定肌红蛋白的浓度。本发明采用价廉易制备的核酸适配体荧光传感器对肌红蛋白进行检测，可实现肌红蛋白的精准检测。该方法设计简单、成本低、检测步骤少，操作简便，灵敏度高，选择性好。

技术领域

本发明涉及分析检测技术领域，具体涉及一种检测肌红蛋白的核酸适配体荧光传感器及其构建方法。

背景技术

肌红蛋白是一种小分子蛋白，在肌细胞内起着转运和贮存氧的功能。在正常人体血清中，肌红蛋白的含量很少，约为30-90ng/mL，当心肌受损时，肌红蛋白会迅速从受损细胞中释放到血液中，导致血液中肌红蛋白的含量明显升高，可升至200-900ng/mL，因此可作为急性心肌梗死早期诊断的标志物。

急性心肌梗死是临床上常见的心血管疾病。该病是由心肌缺血、缺氧所导致，具有起病急、死亡率高等特征，严重威胁患者的生命安全。临床上治疗该病的关键是尽早发现、尽早确诊、尽早治疗，这样才能提升患者的成功救治率，改善预后。

现代医学研究表明,血清学检验在急性心肌梗死临床诊断中有着重大意义，对心肌标志物(如肌红蛋白)进行精准检测，可反映患者病情，为急性心肌梗死的早期诊断、心血管疾病的临床准确诊断、鉴别诊断和判断治疗效果提供重要依据。因此在临床上建立快速、准确、高效的心肌标志物的检测方法尤为重要。

目前，检测肌红蛋白的方法主要有液相色谱法、质谱法、表面增强拉曼散射法、巨磁阻抗免疫法、电化学免疫法、荧光法、表面等离子体共振法、酶联免疫吸附试验法、比色法和化学发光法等，酶联免疫吸附试验法是一种经典的、被广泛应用于临床的免疫测定方法，适合于批量标本检测，但这种方法影响因素较多，存在分离和洗涤步骤繁琐、测定周期偏长等问题。化学发光法虽然安全、灵敏、通用性强，但该方法仪器成本相对较高。质谱法虽然灵敏度、特异性较高，但仪器较贵，且目前由于其数据库尚不健全，所以还未能得到广泛的应用。此外，上述检测肌红蛋白的方法大多是基于抗体抗原的相互识别构建的检测体系，其优势在于免疫分析具有较高的选择性和灵敏度，但抗体制备需要经过免疫动物实验或细胞实验，繁琐费时，成本高。且抗体易受外界条件尤其是温度的影响，对保藏条件要求苛刻，在很大程度上限制了这些方法的灵活应用。

核酸适配体是经体外SELEX技术(指数富集配体的系统进化技术)筛选得到的一小段单链寡核苷酸序列。它是一类具有特定三维构象的小分子RNA或单链DNA，其长度一般为20～80个碱基，相对分子质量为6000～30000。由于核酸适配体结构和空间构象的多样性，可通过链内某些互补碱基的配对以及静电作用、氢键作用与靶目标分子形成一些稳定的三维空间结构(如发卡、假结、凸环、G-四分体等)，并以高亲和力与之结合，因而可特异性识别小分子、蛋白质、细菌、病毒和细胞。与抗体相比，核酸适配体具有高特异性、高亲和力、无(或低)免疫原性、低成本、易合成、易修饰、易固定、靶目标范围广、可反复使用和长期保存等优点。

荧光分析法具有检出限低、灵敏度高、快速、仪器简单等优点，将核酸适配体和荧光分析法两者结合起来，可发展可靠、快捷、高选择性、高灵敏度的核酸适配体荧光分析方法，实现缓冲溶液乃至人体血清中肌红蛋白的准确、快速、高效检测。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用核酸适配体荧光传感器对肌红蛋白进行检测的试剂盒，实现对肌红蛋白的精准检测，解决急性心肌梗死的早期诊断问题。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：