[发明专利]短须库蠓的特异基因及其分子鉴定方法在审
申请号: | 201910177998.5 | 申请日: | 2019-03-08 |
公开(公告)号: | CN109810982A | 公开(公告)日: | 2019-05-28 |
发明(设计)人: | 郑爱萍;杨美琼;林妙端;陈敏 | 申请(专利权)人: | 福建国际旅行卫生保健中心(福建出入境检验检疫局口岸门诊部) |
主分类号: | C12N15/12 | 分类号: | C12N15/12;C12N15/11;C12Q1/6869;C12Q1/6888 |
代理公司: | 北京易捷胜知识产权代理事务所(普通合伙) 11613 | 代理人: | 蔡晓敏 |
地址: | 350001*** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 短须 库蠓 分子鉴定 基因 特异基因 昆虫 同源性比对 昆虫鉴定 同源性 准确率 可用 物种 | ||
1.短须库蠓的特异基因,其特征在于:所述特异性基因为COⅠ基因、Cyt b基因中的一种或两种的组合,COⅠ基因的序列为SEQ ID NO.1,所述Cyt b基因序列为SEQ ID NO.2。
2.如权利要求1所述的短须库蠓特异基因扩增引物,其特征在于:所述COⅠ基因的引物序列为:
正向引物:5’GGT CAA CAA ATC ATA AAG ATA TTG G 3’,
反向引物:5’TAA ACT TCA GGG TGA CCA AAA AAT CA 3’。
3.如权利要求1所述的短须库蠓特异基因扩增引物,其特征在于:所述Cyt b基因的引物序列为:
正向引物为:5’GGACAAATATCATTTTGAGGAGCWACAG 3’,
反向引物为:5’ATTACTCCTCCTAATTTATTAGGAATTG 3’。
4.一种短须库蠓的分子鉴定方法,其特征在于,其包括以下步骤:将待测的昆虫DNA序列,分别与短须库蠓COⅠ基因和Cyt b基因序列同源性比对,当同源性均达到98%以上,则判断为待测的昆虫为短须库蠓。
5.如权利要求4所述短须库蠓的分子鉴定方法,其特征在于:所述昆虫DNA分别采用COⅠ基因扩增引物和Cyt b基因扩增引物,进行扩增,分别得到COⅠ目的产物和Cyt b目的产物,进行测序后,再与短须库蠓COⅠ基因和Cyt b基因同源性比对。
6.如权利要求4所述的短须库蠓的分子鉴定方法,其特征在于,其包括以下步骤:
S1:从待测的昆虫组织中分离提取DNA;
S2:将所提取得到的DNA为模板,采用COⅠ基因引物通过聚合酶链式反应扩增得COⅠ产物;
S3:将所提取得到的DNA为模板,采用Cyt b基因引物通过聚合酶链式反应扩增得Cyt b产物;
S4:将所得到的COⅠ产物和Cyt b产物分别经电泳分离检测,若COⅠ产物分离得到大小为500~750bp的条带,则保存为第一目的条带;若Cyt b产物分离得到大小为400~500bp的条带,则保存为第二目的条带;
S5:将所得到的第一目的条带和第二目的条带分别测序得到第一序列和第二序列;若第一序列与SEQ ID NO.1的基因序列,且第二序列与SEQ ID NO.2的基因序列同源性均达到98%以上,则可判断为待测的昆虫为短须库蠓。
7.如权利要求6所述的短须库蠓的分子鉴定方法,其特征在于:所述COⅠ基因的引物序列为:
正向引物:5’GGT CAA CAA ATC ATA AAG ATA TTG G 3’,
反向引物:5’TAA ACT TCA GGG TGA CCA AAA AAT CA3’。
8.如权利要求6所述的短须库蠓的分子鉴定方法,其特征在于:所述Cyt b基因的引物序列为:
正向引物为:5’GGACAAATATCATTTTGAGGAGCWACAG 3’,
反向引物为:5’ATTACTCCTCCTAATTTATTAGGAATTG 3’。
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