[发明专利]渗透性保护剂、无血清冻存液以及该无血清冻存液的制备与使用方法

权利要求书

1.一种渗透性保护剂，其特征在于：所述渗透性保护剂为富里酸。

2.一种无血清冻存液，其特征在于：按体积百分比包括：88％-94％的无血清培养基，6％-12％的渗透性保护剂，所述渗透性保护剂为富里酸。

3.根据权利要求2所述的无血清冻存液，其特征在于：所述无血清培养基包括3-10g/L人血白蛋白、30-100mg/L谷胱酰肽以及基础培养基，所述基础培养基为RPMI1640、DMEM、F12、DMEM/F12或IMDM中的一种或几种，所述无血清培养基pH为6.8-7.4。

4.根据权利要求2所述的无血清冻存液，其特征在于：按体积百分比包括：92％的无血清培养基，8％的渗透性保护剂。

5.一种根据权利要求1-3任意一项所述的无血清冻存液的制备方法，其特征在于：将装有所述无血清冻存液的灭菌过滤器安装在超净工作台或安全柜中，用压力泵将混匀液体泵出，分装到无菌容器中；将分装好的容器密封并将其储存在4至10℃冷藏柜，且需避光。

6.一种根据权利要求5制备的无血清冻存液的使用方法，其特征在于：

包括：

细胞冻存：将细胞加入所述无血清冻存液重悬,将细胞悬液加入到冻存管中,冻存管置于已处于常温状态的程序降温盒中,再将程序降温盒放置于-80℃超低温冰箱过夜,第二天转移至液氮罐冻存架中保进一步地；

冻存细胞复：从液氮容器中取出冻存管直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化；从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀；在1000rpm情况下离心5min。