[发明专利]一种人源化PD-L1单克隆抗体、其制备方法和应用

说明书

本发明涉及生物医药工程技术领域，特别是涉及一种抗PD‑L1人源化兔单抗。本发明提供了一种新的人源化兔抗PD‑L1单克隆抗体，公布了这种人源化兔单抗的氨基酸序列，相应的表达载体和能够表达该抗体的宿主细胞，以及本发明抗体的生产方法。具体而言，本发明提供的抗PD‑L1单抗是免疫兔后经人源化改造所得，在哺乳动物细胞中具有较高的表达量，能够特异结合于胞外区PD‑L1蛋白，具有明显的抑制配体‑受体结合的能力，阻断PD1与PD‑L1的结合，恢复T细胞的功能。可作为免疫检查点抑制剂，特别是治疗和预防、或诊断PD‑L1相关病例例如肿瘤中的用途。

技术领域

本发明属于生物医药工程技术领域，具体涉及一种人源化兔PD-L1单克隆抗体、其制备方法和应用。

背景技术

兔是众所周知的，可针对许多抗原产生多种抗体，包括在小鼠中不具有免疫原性的磷酸肽，碳水化合物和免疫原。来自兔的多克隆抗体已被证明在实验室中非常有用。然而，免疫期间的不一致和有限的抗体产生量阻碍其临床应用，直到可以产生兔单克隆抗体。目前，商业化的兔单抗已经发展了两代：第一代是以杂交瘤技术为基础的单抗大规模制备平台；第二代是以噬菌体展示技术为基础的大规模制备平台。但是,第一代兔单抗的发展极大地受到了骨髓瘤细胞系的局限，加之专利的缘故，价格高昂。而第二代兔单抗的出现，巧妙地绕开了骨髓瘤细胞的局限，通过融和噬菌体展示技术、基因工程抗体技术和多种表达和纯化技术，直接筛选有效抗体，成功实现了兔单抗产品的又一次发展。与传统的各种来源的抗体相比，兔单抗至少具备更广泛的抗体谱、免疫球蛋白结构简单、更高特异性和亲和力、易于人源化和优质单抗药的候选应用等多种优势。

众多的RabMAb已广泛应用于生命科学研究的各种应用如IHC、WB、IP和FCM。RabMAb已经被证明是免疫组织化学(IHC)中的优异试剂，并且在检测蛋白质的翻译后修饰，例如磷酸化和活化表现极好。此外，科学家还开发了一些RabMAb，用于检测针对癌症的靶向治疗中的生物标志物。兔单抗在科学研究领域的需求也是与日俱增，所以提供优质的兔单抗产品也显得尤为重要。

更广泛的抗体谱：从抗体开发的经验来看，兔的免疫系统可以产生识别更多独特表位的抗体。众所周知，兔有不同于人类和小鼠的免疫应答机制，当用外界抗原进行免疫时，兔能产生强于人和小鼠的免疫应答反应。人和小鼠通过组合连接重链的多个VH，D和JH基因片段和轻链的多个V(γ)和J(γ)基因片段来产生它们的主要抗体谱系。第二阶段，体细胞超突变引起基因重排而产生的VJ和VDJ进一步丰富抗体谱，增加了抗体亲和力的多样性。虽然兔子的主要抗体谱系产生机制与人和小鼠类似，但是在第二阶段抗体谱系的产生机制中，不但有体细胞超突变过程，额外还有一个基因转换机制，这就进一步丰富了兔子的抗体谱。也正因如此，兔抗甚至可以识别部分鼠抗不能识别的抗原。当你的实验应用中必须使用具有弱免疫原性的抗原时，选择兔抗体系是非常明智的策略。

免疫球蛋白结构更简单：众所周知，免疫球蛋白为五类，它们由其重链类型定义：IgG为Cγ；Cμ用于IgM；Cα用于IgA；IgE为Cε，IgD为Cδ。研究发现，兔免疫球蛋白为四类(不含IgD)。兔血清中最丰富的免疫球蛋白是IgG，血清浓度为5-20mg/ml。与其他动物的IgG不同，兔IgG没有亚类。与小鼠和人IgG相比，兔IgG在N末端和D-E环中倾向于具有较少的氨基酸，并且在重链的可变区具有额外的二硫键，这可能是使得兔单抗稳定性更高的原因。正是由于兔IgG这种更简单的结构和更稳定的性质，才使得抗体药物开发中关键抗体的分子克隆变的更加容易，也使得实验室中的各种应用实验结果更加稳定。

更高亲和力：高亲和力是免疫试验成功的前提，也是衡量一个优质单抗的基础指标。抗体药物的非特异性相互作用会引起副作用，因此高亲和力对于制备一些优质抗体药物非常重要。大多数单抗的解离常数(Kd)在纳摩尔或亚纳米级别，但是兔单抗的在皮摩尔级，具有更高亲和力。兔单抗的高亲和力和高特异性，使得其具有更好的实验应用潜力。兔单抗在IHC应用中的优异表现也验证了我们的观点，简单可靠的兔单抗已经成为部分科学家的“小红人”。