[发明专利]一种人源化PD-L1单克隆抗体、其制备方法和应用

权利要求书

1.人源化PD-L1单克隆抗体，所述抗体是IgG1形式的抗体或IgG2形式或IgG4形式的抗体或抗原结合片段，为人源化兔的单克隆抗体，其特征在于：包含轻链LCDR1、LCDR2、LCDR3和重链HCDR1、HCDR2、HCDR3；

所述LCDR1序列是QQSQNVYSX1NRLS(SEQ ID NO：7)或与其具有至少80％序列同一性的同源序列；

所述LCDR2序列是WTSX2LAS(SEQ ID NO：8)或与其具有至少80％序列同一性的同源序列；

所述LCDR3序列是AGGYSGNX3YX4(SEQ ID NO：9)或与其具有至少80％序列同一性的同源序列；

所述HCDR1序列是GX5X6LX7X8Y(SEQ ID NO：10)或与其具有至少80％序列同一性的同源序列；

所述HCDR2序列是SYX9X10X11(SEQ ID NO：11)或与其具有至少80％序列同一性的同源序列；

所述HCDR3序列是DRPDGX12X13TNL(SEQ ID NO：12)或与其具有至少80％序列同一性的同源序列；

其中X1是N或D；X2是T或F；X3是V或L；X4是T或N；X5是I或F；X6是D或S；X7是S或N；X8是S或D；X9是V或Y，X10是S或D；X11是R或T；X12是A或T；X13是A或T。

2.一种如权利要求1所述的人源化PD-L1单克隆抗体的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)制备PD-L1抗原：构建含有PD-L1-ECD序列(GenBank Accession:AY714881.1)的真核表达的载体pCD-PD-L1-AVI-His，瞬转Expi293细胞后收集上清，Ni-NTA亲和树脂纯化得到PD-L1蛋白；

(2)兔单抗的产生：制备重组人PD-L1抗原蛋白，选取兔2只，经皮下注射免疫，免疫结束后取兔血清，利用ELISA检测免疫后血清阻断PD1/PD-L1的活性，选取阻断活性高的兔，利用SMab平台进行筛选，最终得到13个具有潜在PD-L1抑制活性的克隆，择优选取了3个具有阻断活性的候选克隆，扩增其抗体轻链可变区VL和重链可变区VH基因，连接至克隆载体进行DNA测序分析，3个克隆全部获得完整VL和VH的DNA和氨基酸序列；

(3)兔抗人源化改造：选取1个特性较优且具有PD-L1抑制活性的克隆用于下游人源化改造，使用“CDR移植”技术对较优克隆的抗PD-L1兔单抗进行人源化改造，分别将轻链可变区VL和重链可变区VH基因的兔源框架区氨基酸序列替代为人源框架区氨基酸序列，保留了各3个CDR区氨基酸序列，并针对一些可能影响抗体理化性质的氨基酸设计回复突变。

3.一种如权利要求1所述的一种人源化PD-L1单克隆抗体衍生物，其特征在于，衍生物为所述抗PD-L1人源化兔单抗的片段、抗体/抗体片段-因子融合蛋白或抗体/抗体片段-化学偶联物；所述抗PD-L1人源抗体的片段为Fab、Fab’、F(ab’)²、Fv或scFv。

4.一种多核苷酸，其特征在于：编码权利要求1-3任一权利要求所述的抗PD-1人源化兔单抗的重链和/或轻链的可变区或全长氨基酸。

5.一种载体或载体组，其特征在于：包含权利要求4所述的多核苷酸。

6.一种宿主细胞，其特征在于：包含权利要求5所述的载体或载体组，优选地，所述宿主细胞是原核的或真核的，更优选的选自酵母细胞、哺乳动物细胞或适用于制备抗体或其抗原结合片段的其它细胞。

7.一种免疫偶联物，其特征在于，所述免疫偶联物包括：与治疗剂或诊断剂连接的如权利要求1-3中任一项所述的人源化PD-L1单克隆抗体。