[发明专利]氨基酸光学探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种光学探针，包含氨基酸敏感多肽和光学活性多肽，其中，光学活性多肽位于氨基酸敏感多肽的序列内，氨基酸敏感多肽的序列如SEQ ID NO:1所示或者如SEQ ID NO:1所示并且具有选自以下的一个或多个突变：F77A，F77Q，F77L，A100G，D121E，D121T，D121V，Y150S，D226E，D226N，G227S，Y275Q和Y275F，

所述光学活性多肽位于所述氨基酸敏感多肽的选自以下的一个或多个位点：120/121，121/122，121/123，324/330，325/330和326/330。

2.如权利要求1所述的光学探针，其特征在于，所述光学活性多肽是荧光蛋白。

3.如权利要求1所述的光学探针，其特征在于，所述光学探针如SEQ ID NO:10-25中任一项所示。

4.一种核酸分子，其含有编码权利要求1-3中任一项所述的光学探针的核酸序列。

5.一种表达载体，其包含与表达控制序列操作性连接的如权利要求4所述的核酸分子。

6.一种宿主细胞，其包含权利要求4所述的核酸分子或权利要求5所述的表达载体。

7.一种制备权利要求1-3中任一项所述的光学探针的方法，包括以下步骤：

(1)将权利要求5所述的表达载体转移到宿主细胞中，

(2)在适合所述表达载体表达的条件下培养所述宿主细胞，和

(3)由所述宿主细胞分离所述光学探针。

8.权利要求1-3中任一项所述的光学探针在制备检测样品中的丙氨酸的试剂盒中的应用。

9.一种检测试剂盒，其包含权利要求1-3中任一项所述的光学探针或权利要求7所述方法制备的光学探针。

10.一种检测样品中丙氨酸的非诊断方法，包括：使权利要求1-3中任一项所述的光学探针与样品接触，检测光学活性多肽的变化，并根据光学活性多肽的变化检测样品中的丙氨酸。

11.一种筛选化合物的方法，包括：将候选化合物与表达光学探针的细胞接触，测定光学活性多肽的变化，和根据光学活性多肽的变化筛选出对丙氨酸含量变化有影响的化合物，所述光学探针如权利要求1-3中任一项所述。

12.光学探针在制备检测样品中的氨基酸的试剂盒中的应用，所述氨基酸选自缬氨酸、丝氨酸、异亮氨酸、苏氨酸和半胱氨酸中的一种或多种，所述光学探针包含氨基酸敏感多肽和光学活性多肽，其中，

光学活性多肽位于氨基酸敏感多肽的序列内，

氨基酸敏感多肽的序列如SEQ ID NO:1所示，

所述光学活性多肽位于所述氨基酸敏感多肽的121/122位点。

13.一种检测样品中氨基酸的非诊断方法，包括：使光学探针与样品接触，检测光学活性多肽的变化，并根据光学活性多肽的变化检测样品中的氨基酸，所述氨基酸选自缬氨酸、丝氨酸、异亮氨酸、苏氨酸和半胱氨酸中的一种或多种，所述光学探针包含氨基酸敏感多肽和光学活性多肽，其中，

光学活性多肽位于氨基酸敏感多肽的序列内，

氨基酸敏感多肽的序列如SEQ ID NO:1所示，

所述光学活性多肽位于所述氨基酸敏感多肽的121/122位点。

14.一种筛选化合物的方法，包括：将候选化合物与表达光学探针的细胞接触，测定光学活性多肽的变化，和根据光学活性多肽的变化筛选出对氨基酸含量变化有影响的化合物，所述氨基酸选自缬氨酸、丝氨酸、异亮氨酸、苏氨酸和半胱氨酸中的一种或多种，所述光学探针包含氨基酸敏感多肽和光学活性多肽，其中，

光学活性多肽位于氨基酸敏感多肽的序列内，

氨基酸敏感多肽的序列如SEQ ID NO:1所示，

所述光学活性多肽位于所述氨基酸敏感多肽的121/122位点。