[发明专利]一种目标物介导的荧光比率型传感器检测赭曲霉素A的检测方法

权利要求书

1.一种目标物介导的荧光比率型传感器检测赭曲霉素A的检测方法，其特征在于：利用目标物赭曲霉素A诱导介孔硅球释放钌联吡啶以及荧光硅量子点与钌联吡啶之间具有荧光能量转移的特点，构建荧光比率型传感器对赭曲霉素A进行检测；

其中，所述介孔硅球为适配体封闭钌联吡啶填充的氨基功能化的介孔硅球， 所述适配体的序列为：5’-GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACA-3'；

所述检测方法，包括以下步骤：

步骤一：制备水溶性硅量子点；

步骤二：制备适配体封闭钌联吡啶填充的氨基功能化的介孔硅球；

步骤三：配制不同浓度的赭曲霉毒素A标准溶液；

步骤四：绘制荧光强度比值与赭曲霉毒素A浓度的标准曲线并获得荧光强度比值与赭曲霉毒素A浓度的线性回归方程：

将不同浓度的赭曲霉毒素A标准溶液分别加入到适配体封闭钌联吡啶填充的氨基功能化的介孔硅球中，在37^◦C下振荡10-80min后，分别离心，再在离心所得的上清液中，分别加入水溶性硅量子点，且145mL的上清液中加入5mL 的水溶性硅量子点；之后利用荧光光度计在400~680 nm下对上述加有水溶性硅量子点的上清液进行检测，并分别记录这些上清液在442nm与625nm处的荧光强度，进而获得这两个波长下荧光强度的比值，根据赭曲霉毒素A标准溶液的浓度以及相应的荧光强度比值，绘制出荧光强度比值与赭曲霉毒素A浓度的标准曲线；根据所得的标准曲线，进一步获得荧光强度比值与赭曲霉毒素A浓度的线性回归方程；

步骤五：待测液检测：将待测液加入到适配体封闭钌联吡啶填充的氨基功能化的介孔硅球中，在37^◦C下振荡10-80min；接着离心后，将5mL 的水溶性硅量子点加入到145mL离心所得的上清液中，利用荧光光度计在400~680 nm下对加有水溶性硅量子点的上清液进行检测，并记录该上清液在442nm与625nm处的荧光强度，获得这两个波长下荧光强度的比值，将该荧光强度的比值代入步骤四所得的线性回归方程中，经计算得待测液的赭曲霉毒素A浓度。

2.根据权利要求1所述的目标物介导的荧光比率型传感器检测赭曲霉素A的检测方法，其特征在于：步骤一制备水溶性硅量子点的具体方法为：将柠檬酸三钠、 3-氨丙基三乙氧基硅烷分散在充满氮气的蒸馏水，振荡均匀；混合液转移入聚四氟乙烯反应釜中，在170-190^◦C下密闭加热4-6小时；之后，转入3 kDa的透析袋中透析过夜后，定容备用。

3.根据权利要求1所述的目标物介导的荧光比率型传感器检测赭曲霉素A的检测方法，其特征在于：步骤二制备适配体封闭钌联吡啶填充的氨基功能化的介孔硅球的具体方法为：

（1）介孔硅球的合成：将四乙氧基硅烷、乙醇、水以及氨水混合，在室温下搅拌2-3小时得到介孔硅球；

（2）氨基功能化的介孔硅球的制备：将步骤（1）所得的介孔硅球干燥后分散在乙醇中，再加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，搅拌过夜，离心分离后得到氨基功能化的介孔硅球；

（3）配制适配体溶液；

（4）适配体封闭钌联吡啶填充的氨基功能化的介孔硅球的制备：步骤（2）所得的氨基功能化的介孔硅球与钌联吡啶水溶液混合，振荡放置24小时；之后再将配制好的适配体溶液加入体系中，反应4-5小时；接着，混合物用缓冲溶液清洗3-4次后，分散在缓冲溶液中，得到了适配体封闭钌联吡啶填充的氨基功能化的介孔硅球；

其中，所用的缓冲溶液包括10mM Tris-HAc、50mM NaCl以及10mM MgCl₂，且pH为7.4。