[发明专利]环状RNA快速富集试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种环状RNA快速富集试剂盒，该试剂盒包括无核糖核酸酶水、探针杂交缓冲液、探针组及纯化试剂；所述试剂盒配套含有磁力架；其中，所述探针组所包含的探针的序列5’端均经过生物素修饰；其中，探针杂交缓冲液为由浓度为100nM的NaCl、浓度为1mM的MgCl₂及浓度为1mM的Tris组成的水溶液。本发明环状RNA快速富集效果稳定，提高了环状RNA的检出率，避免了因Rnase R不耐受而导致的环状RNA丢失，纯化富集流程简单，可一步同时去除rRNA和其他线性RNA，实验周期短，1个小时内即可完成，样品损耗低。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，尤其涉及一种环状RNA快速富集试剂盒及方法。

背景技术

环状RNA(circular RNA,circRNA)是具有闭合环状结构的一类新型RNA分子，颠覆了RNA都是线性分子的传统理论。环状RNA稳定性好，能在血浆、唾液、尿液等体液中稳定存在，是一种新型疾病分子标志物。研究环状RNA可以帮助我们全面解析疾病信号通路，开发新型临床诊断方法，寻找疾病治疗新靶点，在科研和临床领域均具有重要意义。

真核转录组中除了环状RNA外，还包含多种其它类型的RNA分子，如：核糖体RNA(rRNA)，信使RNA(mRNA)和长链非编码RNA(LncRNA)。其中，rRNA的比例高达80％以上，mRNA的比例约1％-5％，而环状RNA的比例不足0.5％。为了准确的检测和鉴定环状RNA，需要从总RNA中去除其它无关RNA，特异性对环状RNA进行纯化和富集。

目前，市场上还没有针对环状RNA纯化富集的试剂盒。市场上现有环状RNA纯化富集方法主要包括以下步骤：1、通过去rRNA试剂盒去除总RNA中的rRNA；2、通过Rnase R对去除rRNA后的样品进行消化；3、将步骤2中所得消化后的RNA样品进行纯化回收。

上述环状RNA富集纯化方法主要存在以下问题：

1.Rnase R不稳定，不同批次酶活差异极大，从而易导致环状RNA纯化富集效果不稳定；

2.Rnase R不仅能消化线性RNA，还能消化部分环状RNA，从而可导致环状RNA纯化富集过程中部分环状RNA的丢失；

3.流程繁琐，实验周期需3～4小时，费时费力，样品损耗大。

发明内容

本发明的目的是克服上述不足，提供了一种环状RNA快速富集试剂盒及方法，环状RNA纯化富集效果稳定，提高了环状RNA的检出率，避免了因Rnase R不耐受而导致的环状RNA丢失，纯化富集流程简单，可一步同时去除rRNA和其他线性RNA，实验周期短，仅需1个小时即可完成，样品损耗低。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案，

本发明第一方面提供了环状RNA快速富集试剂盒，包括无核糖核酸酶水、探针杂交缓冲液、探针组及纯化试剂；所述试剂盒配套含有磁力架；其中，所述探针组所包含的探针的序列5’端均经过生物素修饰。

优选的，所述探针杂交缓冲液为由浓度为100nM的NaCl、浓度为1mM的MgCl2及浓度为1mM的Tris组成的水溶液，所述探针杂交缓冲液pH为7.5。

优选的，所述纯化试剂为链酶亲和素磁珠悬浮液及RNA纯化磁珠。

进一步的，所述链酶亲和素磁珠悬浮液为由浓度为100mM的NaCl和浓度为5mM的Tris组成的水溶液，所述链酶亲和素磁珠悬浮液pH为7.0。

优选的，所述纯化试剂为亲和素磁珠悬浮液及RNA纯化磁珠。

进一步的，所述亲和素磁珠悬浮液为由浓度为100mM的NaCl和浓度为5mM的Tris组成的水溶液，所述亲和素磁珠悬浮液pH为7.0。