[发明专利]利用脂肪组织直接再生肥大软骨组织的方法

权利要求书

1.一种利用脂肪组织直接再生肥大软骨组织的方法，其特征在于，包括：

(1)微粒脂肪组织的体外增殖培养；

微粒脂肪组织经过体外增殖培养后，形成富含丰富ASC并仍具有多向分化潜能的组织块；

(2)肥大软骨组织的体外构建；

取步骤(1)体外增殖培养后的样本，经过体外软骨内成骨诱导培养，直接分化成肥大软骨组织；

其中，所述体外软骨内成骨诱导培养包括成软骨诱导培养和肥大诱导培养两个阶段；先使用成软骨诱导培养基诱导培养，然后使用肥大诱导培养基诱导培养。

2.根据权利要求1所述的一种利用脂肪组织直接再生肥大软骨组织的方法，其特征在于，所述体外增殖培养基为：

α-MEM+10％FBS+1％PSG+1％HEPES+地塞米松(10^-7mol/L)+抗坏血酸(10^-5mol/L)+FGF-2(2.5-10ng/mL)+PDGF(5-20ng/mL)；其中α-MEM与FBS、PSG、HEPES为体积比。

3.根据权利要求1或2所述的一种利用脂肪组织直接再生肥大软骨组织的方法，其特征在于，所述体外增殖培养的时间为2-4周，每周更换2-3次。

4.根据权利要求1所述的一种利用脂肪组织直接再生肥大软骨组织的方法，其特征在于，所述成软骨诱导培养基诱导培养3-5周；肥大诱导培养基诱导培养2-3周；所述诱导培养基每周换2-3次。

5.根据权利要求1所述的一种利用脂肪组织直接再生肥大软骨组织的方法，其特征在于，所述脂肪组织为人脂肪组织。

6.根据权利要求1所述的一种利用脂肪组织直接再生肥大软骨组织的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的样本，是经过增殖培养的微粒脂肪组织团块。

7.根据权利要求1所述的一种利用脂肪组织直接再生肥大软骨组织的方法，其特征在于，其中成软骨诱导阶段所用培养基为：无血清培养基(SFM)+地塞米松(10^-7mol/L)+抗坏血酸(10^-5mol/L)+BMP-6(5-20ng/mL)+TGF-β₃(5-20ng/mL)；

肥大诱导阶段所用培养基为：SFM+β-甘油磷酸二钠盐(10^-2mol/L)+地塞米松(10^-8mol/L)+抗坏血酸(10^-5mol/L)；

其中SFM：DMEM培养液+1％HSA+1％PSG+1％HEPES+(0.5-2)％ITS+(0.3-1.2)％亚油酸。