[发明专利]NGAL胶乳免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明涉及NGAL胶乳免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法，该试剂盒由试剂R1、试剂R2、校准品及质控品组成，试剂R1包括缓冲液、抗干扰剂、增敏剂、电解质、防腐剂，试剂R2包括连有NGAL抗体的胶乳微球、缓冲液、稳定剂、防腐剂。与现有技术相比，本发明R1试剂中抗干扰剂的使用，显著提高了其抗干扰能力，扩大了中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒的适用人群，同时本发明提高的试剂盒检测还具有灵敏度高、特异性强、试剂盒稳定性好，可高效检测尿液、血浆、血清中的NGAL含量，并且检测结果与进口试剂相关良好。

技术领域

本发明涉及生化技术领域，特别涉及一种灵敏度高、特异性强的胶乳免疫比浊法中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒的制备方法。

背景技术

人类中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associatedlipocalin，NGAL)分子量约25kDa，共价结合于中性粒细胞明胶酶。NGAL生理状态下是一种生长因子，主要参与了早期肾脏上皮的发生、生长。在正常组织包括肾脏、肺、胃及结肠的上皮组织中表达量较低。而急性肾功能损伤过程中NGAL水平偏高，能直接从尿液和血液中检测出来，预后将发展成为急性肾功能衰竭。急性肾损伤(AKI)是一种发病率和死亡率均较高的疾病，由于该病发病机理不明，并且缺乏准确可靠的早期诊断标志物。研究证明，诱导AKI后约2h就能在尿中检测到NGAL，而检测出血肌酐的明显改变要3-4天。另外，儿童心脏手术后发生急性肾衰的患者在手术后2h的血、尿NGAL浓度明显升高，而血肌酐明显升高则在1-3d后，NGAL的测定对AKI的早期诊断更加有力，能比传统的肾损伤标志物更灵敏的反应出肾功能状况。

目前市场上NGAL检测方法有酶免疫法(ELISA)、放射免疫分析法(RIA)、乳胶增强透射免疫比浊法等，但是ELISA和RIA检测法存在操作繁琐，检测时间长；普通透射比浊法存在灵敏度不够；而乳胶增强透射免疫比浊法也存在抗干扰能力弱，特殊血样如乳糜血样等，部分试剂盒甚至能测出负值，不能很好反应特殊体质病人肾功能情况。

因此，需要在以往NGAL胶乳免疫比浊法检测试剂盒的制备基础上进行改良，以提高NGAL胶乳免疫比浊法试剂的抗干扰能力，扩大适应人群。

中国专利CN102662064A公开了检测中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的免疫比浊试剂盒及制备方法，应用液瓶、抗体悬浮液瓶和标准品瓶放置于盒体内，应用液瓶中装有应用液，其组分：表面活性剂0.01％～1％，防腐剂0.01～0.5％，氯化钠1％～20％，缓冲液20～200mmol/L；抗体悬浮液瓶中装有包被中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体的乳胶悬液，其组分：包被中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体的乳胶0.05％～0.5％，表面活性剂0.01％～1％，防腐剂0.01～0.5％，缓冲液20～200mmol/L；标准品瓶中装有中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白标准品。实现在生化仪上大批量定量检测。但该方法生产的试剂在抗干扰方面表现不足，无法准确测量特殊体质的病人健康状况。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白胶乳免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法，该方法制备的试剂盒具有抗干扰能力强可适用检测不同体质病人血样，特别是能准确测定含干扰因子较多的特殊血样。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白胶乳免疫比浊测定试剂盒，由试剂R1、试剂R2、校准品及质控品组成，

所述试剂R1包括缓冲液、抗干扰剂、增敏剂、电解质、防腐剂，

所述试剂R2包括连有NGAL抗体的胶乳微球、缓冲液、稳定剂、防腐剂。

所述抗干扰剂由表面活性剂聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段聚醚与曲拉通按且在试剂R1中缓冲液中质量比为1:1-5:1复配得到。