[发明专利]NGAL胶乳免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.NGAL胶乳免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒由试剂R1、试剂R2、校准品及质控品组成，

所述试剂R1包括缓冲液、抗干扰剂、增敏剂、电解质、防腐剂，所述抗干扰剂由表面活性剂聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段聚醚与曲拉通按质量比为1:1-5:1复配得到；

所述试剂R2包括连有NGAL抗体的胶乳微球、缓冲液、稳定剂、防腐剂；

所述聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段聚醚选自聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段聚醚L61、F68或F108中一种或多种，在试剂R1中缓冲液中质量含量为0.2%-0.8%；

所述曲拉通包括曲拉通X-100或曲拉通X-45中一种或多种，在试剂R1中缓冲液中质量含量为0.15%-0.6%。

2.根据权利要求1所述的NGAL胶乳免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，试剂R1中，

所述缓冲液包括但不限于磷酸盐缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液或MOPS缓冲液，浓度为25-150mM，pH值为6.5-9.0，

所述增敏剂为聚乙二醇6000、聚乙二醇8000或聚乙二醇20000中的一种或多种，在试剂R1中缓冲液中质量含量为0.5%-10%，

所述电解质为氯化钠，在试剂R1中缓冲液中质量含量为0.5%-5%，

所述防腐剂为叠氮化钠或Proclin300中的一种或两种，在试剂R1中缓冲液中质量含量为0.02%-2%。

3.根据权利要求1所述的NGAL胶乳免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，试剂R2中，

所述连有NGAL抗体的胶乳微球为NGAL单抗或多抗连接在聚苯乙烯羧基微球，胶乳微球的直径为100-300nm，在试剂R2中缓冲液中质量含量为0.1%～5%，

所述缓冲液液选自磷酸盐缓冲液（PBS）、三羟甲基氨基甲烷缓冲液（Tris）、3-（N-吗啉基）丙磺酸缓冲液（Mops）、2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲液（MES）、硼酸盐缓冲液或甘氨酸缓冲液或羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液中的一种或多种，pH值为6.5-9.0，

所述稳定剂为甘露醇、牛血清白蛋白、海藻糖中的一种或多种，在试剂R2中缓冲液中质量含量为0.5%-5%，

所述防腐剂为叠氮化钠或Proclin300中的一种或两种，在试剂R2中缓冲液中质量含量为0.02%-2%。

4.根据权利要求1所述的NGAL胶乳免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1与所述试剂R2的体积比为3:1。

5.根据权利要求1所述的NGAL胶乳免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，所述校准品为重组或天然NGAL蛋白。

6.根据权利要求1所述的NGAL胶乳免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，所述质控品为重组或天然NGAL蛋白。

7.如权利要求1-6中任一项所述的NGAL胶乳免疫比浊法检测试剂盒的制备方法，其特征在于，该方法采用以下步骤：

I、试剂R1制备：

取纯化水，依次加入缓冲液、抗干扰剂、增敏剂、电解质、防腐剂，每次添加物料需要搅拌至完全溶解，调节pH值至6.5-9.0，并用0.22μm滤膜进行过滤；

II、试剂R2制备：

（1）活化聚苯乙烯胶乳微球：在胶乳微球中加入1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亚胺盐酸盐，20℃-25℃混合活化30min；

（2）偶联抗体：将中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体加入已活化的聚苯乙烯胶乳微球中，20℃-25℃反应2h进行共价偶联；

（3）洗涤除去未偶联成功的抗体：得到的胶乳微球反应液离心去掉上清，除去游离抗体、小分子杂质；

（4）封闭微球上未偶联抗体的羧基位点：得到的胶乳微球中加入牛血清白蛋白，封闭1h；

（5）混合与保存：使用含稳定剂、防腐剂、缓冲液的R2稀释液，将步骤（4）获得的溶液稀释3~15倍，最终得到试剂R2，于4℃保存；

III、校准品及质控品制备：将天然或重组NGAL蛋白用冻干稀释液进行稀释至目标浓度，进行冻干，于4℃保存；

VI、组成试剂盒：

将上述制备的试剂R1和试剂R2按体积比R1：R2=3:1分装入瓶，与校准品及质控品组成试剂盒。