[发明专利]一种非变性聚丙烯酰胺凝胶的制备方法

说明书

本发明公开了一种非变性聚丙烯酰胺凝胶的制备方法，包括：将丙烯酰胺、亚甲基双丙烯酰胺、凝胶缓冲液、聚乙烯醇、硼砂、纯净水混合，得到丙烯酰胺的质量浓度低于3％的混合溶液；将引发剂和加速剂添加到所述混合溶液中，并将其混合均匀，获得凝胶制备液；将所述凝胶制备液灌入到梯度混合仪的灌胶槽内并进行混合配胶，获得液体梯度胶；将所述液体梯度胶室温放置30‑50min，即可得到凝固的非变性聚丙烯酰胺梯度凝胶。通过本发明制备的非变性聚丙烯酰胺凝胶浓度低于3％，所能分离的蛋白复合物或病毒分子量最大可达到几十万KD。

技术领域

本发明属于凝胶制备技术领域，具体涉及一种非变性聚丙烯酰胺凝胶的制备方法。

背景技术

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳是用于分离和鉴定天然状态大分子蛋白或蛋白复合物的常用手段，其中，在进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳过程中，所配制的聚丙烯酰胺凝胶的浓度是大分子蛋白或蛋白复合物的分离和鉴定的重要影响因素，即聚丙烯酰胺凝胶的浓度越低，聚丙烯酰胺凝胶的孔径越大，可以分离和鉴定的蛋白分子量越大。

由于低于3％浓度的丙烯酰胺几乎无法凝固成胶，因此，市面上买不到低于3％浓度的聚丙烯酰胺凝胶，而目前可以买到的能分离最大分子量蛋白的聚丙烯酰胺凝胶浓度是3-12％，其能分离的蛋白分子量范围是15-10000KD。虽然3-12％非变性聚丙烯酰胺凝胶可以分离高达10000KD的蛋白或蛋白复合物，但是对于几十万KD的病毒和几千KD超大蛋白复合物，此浓度胶的分离效果并不好，大病毒甚至受凝胶孔径限制而不能进胶。因此，制备一种浓度低于3％的非变性聚丙烯酰胺凝胶的方法亟需研究。

发明内容

针对以上现有技术存在的不足之处，本发明提供了一种非变性聚丙烯酰胺凝胶的制备方法。

为实现上述技术目的，本发明通过以下技术方案实现：

一种非变性聚丙烯酰胺凝胶的制备方法，包括：

将丙烯酰胺、亚甲基双丙烯酰胺、凝胶缓冲液、聚乙烯醇、硼砂、纯净水混合，得到丙烯酰胺的质量浓度低于3％的混合溶液；

将引发剂和加速剂添加到所述混合溶液中，并将其混合均匀，获得凝胶制备液；

将所述凝胶制备液灌入到梯度混合仪的灌胶槽内并进行混合配胶，获得液体梯度胶；

将所述液体梯度胶室温放置30-50min，即可得到凝固的非变性聚丙烯酰胺凝胶。

进一步的，在配制所述混合溶液前，还包括：配制含丙烯酰胺和亚甲基双丙烯酰胺质量浓度为30％的丙烯酰胺水溶液，其中，丙烯酰胺水溶液中的丙烯酰胺与亚甲基双丙烯酰胺的质量比为28-30：1。

进一步的，所述凝胶缓冲液由25mmol/L咪唑、500mmol/L甘氨酸的水溶液组成，所述凝胶缓冲液的pH值为7.0。

进一步的，在配制所述混合溶液时，所述凝胶缓冲液与所述丙烯酰胺水溶液的体积比为9-11:1。

进一步的，在配制所述混合溶液前，还包括：配制含聚乙烯醇的质量浓度为5％的聚乙烯醇水溶液。

进一步的，在配制所述混合溶液时，所述聚乙烯醇水溶液与所述丙烯酰胺水溶液的体积比为1-2:1。

进一步的，在配制所述混合溶液前，还包括：配制含硼砂的质量浓度为1％的硼砂水溶液，并在配制所述混合溶液时，所述硼砂水溶液与所述丙烯酰胺水溶液的体积比为1:8-15。

进一步的，所述引发剂为过硫酸铵的质量浓度为10％的过硫酸铵水溶液。

进一步的，所述加速剂为四甲基乙二胺。

进一步的，在将引发剂和加速剂添加到所述混合溶液中，并将其混合均匀，获得凝胶制备液后，还包括：