[发明专利]一种从溶血血清中分离白蛋白的工艺

说明书

本发明公开了一种从溶血血清中分离白蛋白的工艺，其特征在于：包括以下步骤：(1)在溶血血清中加入活性炭，冷冻，后于常温静置，直至血清完全冻融分层，抽取上层溶液，过滤收集滤液A；(2)将滤液A凝胶层析，收集洗脱液得溶液B；(3)在溶液B中加入羧基化四氧化三铁纳米磁珠，室温孵育后，过滤分离得到溶液C；(4)将溶液C超滤除杂，浓缩，得蛋白浓缩液D；(5)将蛋白浓缩液D进行病毒灭活后干燥得白蛋白粉末。该方法原料成本低，制备得到的白蛋白纯度好，安全性高。

技术领域

本发明涉及一种从溶血血清中分离白蛋白的工艺。

背景技术

血清蛋白又称白蛋白。一类分子量较小，呈球状，能溶于水的蛋白质。主要存在于哺乳动物、细菌、霉菌和植物中。卵白蛋白、乳白蛋白、豆白蛋白和血清白蛋白等都属此类。卵白蛋白是蛋清中的一种重要蛋白质，约占蛋清总蛋白的70％。血清白蛋白是血清中含量最丰富的蛋白质，占血清总蛋白量的50％以上，不含糖。血清白蛋白在血液中有重要生理功能，和维持血液正常渗透压有关，是血液总渗透压的主要调节物质，缺少该白蛋白可能导致机体浮肿。血清白蛋白的另一作用是作为脂肪酸的载体参与运送脂肪酸。血清蛋白用作血溶扩充剂，代替输血，可提高血浆胶体渗透压，增加血容量，主要用于预防和抢救失血性休克、创伤性休克、严重烧伤烫伤等；可补充机体白蛋白，提高血浆白蛋白的浓度，用于治疗低蛋白症、肝硬化、肾病疾患所致的腹水和水肿，以及脑水肿或大脑损伤所引起的脑压升高等。

白蛋白的制备方法较多，目前常用的方法有：盐析法和有机溶剂沉淀法。盐析法主要工艺流程是：将新鲜血液离心→纯水稀释→加40～50％的硫酸铵、离心弃沉淀，取上清→透析脱盐→聚乙二醇浓缩→冻干为成品。盐析法具有以下缺点：硫酸铵用量大，需要20-40倍体积的纯水透析脱盐；费时，透析需要48h，浓缩需要24h，整个工艺流程需要5天；收率低，一般为0.8～1％；废水处理量大，透析脱盐产生大量废水，含有较高的硫酸铵，处理成本高。有机溶剂沉淀法以E.J.Cohn氏法最常用，但该方法需0～5℃低温进行，费时费力，整个工艺流程需7天，收率不高，1％左右，环保处理难度大，要建有机溶剂回收工艺，成本高。并且，目前的白蛋白提取方法对血清要求较高，要求血清不能溶血，这对白蛋白的制备带来极大的限制。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从溶血血清中分离白蛋白的工艺。

本发明所采取的技术方案是：

一种从溶血血清中分离白蛋白的工艺，其特征在于：包括以下步骤：

1)在溶血血清中加入活性炭，冷冻，后于常温静置，直至血清完全冻融分层，抽取上层溶液，过滤收集滤液A，优选的，冷冻温度为-20℃；

2)将滤液A凝胶层析，收集洗脱液得溶液B；

3)在溶液B中加入羧基化四氧化三铁纳米磁珠，室温孵育后，过滤分离得到溶液C；

4)将溶液C超滤除杂，浓缩，得蛋白浓缩液D；

5)将蛋白浓缩液D进行病毒灭活后干燥得白蛋白粉末。

进一步地，活性炭与溶血血清的质量体积比(g/L)为(30～50)：1。

进一步地，步骤1)中过滤使用的滤纸孔径为0.4～0.5μm。

进一步地，凝胶层析时使用醋酸钠溶液进行洗脱，醋酸钠溶液的pH值为7.5～8.5，洗脱流速为45～55cm/h。

进一步地，羧基化四氧化三铁纳米磁珠以1～3％的质量分数加入溶液B。

进一步地，使用孔径为0.4～0.5μm超滤膜超滤。

进一步地，超滤之后还需要使用截留分子量为10kDa的板式超滤膜超滤除盐，得到蛋白浓缩液D。