[发明专利]一种从溶血血清中分离白蛋白的工艺有效
| 申请号: | 201910105614.9 | 申请日: | 2019-02-01 |
| 公开(公告)号: | CN109734796B | 公开(公告)日: | 2022-04-15 |
| 发明(设计)人: | 李长路 | 申请(专利权)人: | 广州蕊特生物科技有限公司 |
| 主分类号: | C07K14/765 | 分类号: | C07K14/765;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16 |
| 代理公司: | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人: | 胡辉 |
| 地址: | 510663 广东省广州市科学*** | 国省代码: | 广东;44 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 溶血 血清 分离 白蛋白 工艺 | ||
1.一种从溶血血清中分离白蛋白的工艺,其特征在于:包括以下步骤:
1)在溶血血清中加入活性炭,冷冻,后于常温静置,直至血清完全冻融分层,抽取上层溶液,过滤收集滤液A;
2)将滤液A凝胶层析,收集洗脱液得溶液B;
3)在溶液B中加入羧基化四氧化三铁纳米磁珠,室温孵育后,过滤分离得到溶液C;
4)将溶液C超滤除杂,浓缩,得蛋白浓缩液D;
5)将蛋白浓缩液D进行病毒灭活后干燥得白蛋白粉末;
活性炭与溶血血清的质量体积比(g/L)为(30~50):1;
凝胶层析时使用醋酸钠溶液进行洗脱,醋酸钠溶液的pH值为7.5~8.5,洗脱流速为45~55cm/h;
羧基化四氧化三铁纳米磁珠以1~3%的质量分数加入溶液B。
2.根据权利要求1所述的工艺,其特征在于,步骤1)中的冷冻温度为-20℃。
3.根据权利要求1所述的工艺,其特征在于:步骤1)中过滤使用的滤纸孔径为0.4~0.5μm。
4.根据权利要求3所述的工艺,其特征在于:使用孔径为0.4~0.5 μm超滤膜超滤。
5.根据权利要求4所述的工艺,其特征在于:超滤之后还需要使用截留分子量为10 kDa的板式超滤膜超滤除盐,得到蛋白浓缩液D。
6.根据权利要求1所述的工艺,其特征在于:使用巴氏消毒法病毒灭活,在蛋白浓缩液D中加入稳定剂,调节其pH至6.4~7.4,加热至60℃保温10小时。
7.根据权利要求6所述的工艺,其特征在于,所述稳定剂与蛋白浓缩液D的质量体积比(g/L)为0.5~1%,稳定剂选自甘氨酸、蔗糖中的任意一种。
8.根据权利要求7所述的工艺,其特征在于:病毒灭活后的蛋白浓缩液D中加入保护剂,然后进行喷雾干燥。
9.根据权利要求8所述的工艺,其特征在于,所述保护剂为海藻糖。
10.根据权利要求9所述的工艺,其特征在于,所述海藻糖与蛋白浓缩液D的质量体积比(g/L)为5~10%。
11.根据权利要求10所述的工艺,其特征在于:喷雾干燥为离心喷雾干燥法或压力喷雾干燥法,离心喷雾干燥法的转速控制在5000~20000 r/min,压力喷雾干燥法的压力控制在150~250 Kg/cm2,进风温度控制在100~180℃,出风温度控制在60~80℃。
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