[发明专利]化学发光法检测心型脂肪酸结合蛋白试剂盒及使用方法

说明书

本发明适用于生物技术领域，具体涉及一种化学发光法检测心型脂肪酸结合蛋白的检测试剂盒，其特征在于，包括包被有抗H‑FABP单克隆抗体的发光板、辣根过氧化物酶标记的检测用抗H‑FABP单克隆抗体溶液、标准品、样本稀释液、标准品稀释液、浓缩洗涤液、发光液A、发光液B以及检测抗体稀释液。本发明实施例提供的化学发光法检测心型脂肪酸结合蛋白的检测试剂盒，准确性高，灵敏度好；均一性良好，稳定性高；特异性好；可实现对临床血清样本中H‑FABP的快速定量检测，以作为对AMI病人发病早期简便而快速的排除性筛选，操作简单，无污染。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种化学发光法检测心型脂肪酸结合蛋白试剂盒及使用方法。

背景技术

急性心肌梗死(AMI)是临床的常见急危重症。AMI通常发病突然且发展迅速，早发现、早治疗对缩小梗死面积，保护心脏功能有重大意义，可以说是挽救患者生命、提高患者预后的关键所在。1999年ESC和ACC联合建议将检测到心肌标志物的异常变化作为诊断AMI急性发病的必要条件。目前临床常用的生化检测指标是cTnI和CK-MB，然而它们释放到血中的时间较晚，因此，作为AMI的早期诊断并不理想。近年来由于心肌型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)在血液中出现早，特异性高，已成为国内外关注的早期诊断AM I的生化指标之一。

H-FABP是一种重要的细胞内脂肪酸结合蛋白，大量地存在于心肌组织中，是可溶性蛋白质，其分子量小，仅为15KDa，当心肌细胞受损时可快速释放到血液中，在AMI早期(0～3h)即可检测到高水平的血清H-FABP。当心肌细胞缺血、缺氧时，动员脂肪酸的利用供能，导致心肌细胞内H-FABP迅速升高，由于H-FABP分子量小，可快速释放入血。急性心肌梗死后心力衰竭可导致血浆H-FABP水平增高，且增高程度与心力衰竭程度呈正比，因此H-FABP不仅仅是心肌损伤的早期指标，也可作为评价心功能的指标。

H-FABP水平检测对AMI的早期诊断具有较高的灵敏性和特异性，而且在判定严重程度、预后评估及疗效判断等方面均有一定的临床价值。由于H-FABP是一种无酶活性的蛋白质，其定性检测与定量检测都需要借助免疫学方法。从最早的放射免疫法到最近的乳胶微粒增强免疫比浊法以及胶体金免疫技术在H-FABP测定中的应用，H-FABP的临床检测经历了一个检测速度越来越快，检测灵敏度也越来越高的发展过程。

有关FABP定量检测的最早报道是Ockner等于1974年在研究I-FABP时采用的放射免疫法，在这一测定方法中，Ockner等首先通过凝胶过滤柱层析及等电聚焦电泳获得纯化的I-FABP，然后用纯化I-FABP免疫家兔以获得I-FABP抗血清并用14C进行放射性标记，14C标记抗血清与待测标本反应后，通过测定免疫沉淀中放射性比活度来检测相应I-FABP的浓度。Ockner等报道的方法准备过程及测定过程都较为繁琐，价格昂贵且存在放射性污染，在临床检测中缺乏实用价值，但为FABP测定方法的改进奠定了基础。

单克隆抗体的出现及酶联免疫测定法(ELISA)的建立极大地推动了FABP测定方法的改进。Ockner之后，许多研究者在制备了各型FABP单克隆抗体的基础上，报道了多种基于ELISA原理的FABP测定方法，这些方法无放射性污染，操作较为简便快速，测定时间介于2～16h之间，结果的稳定性及重复性较好，有较大的应用价值。特别是1997年Wodzig等报道的一步法ELISA检测FABP，操作尤为简捷，整个测定过程仅需45min，应用较广。