[发明专利]采用高效液相色谱法测定目标杂质校正因子的方法及应用

说明书

本发明公开了一种在杂质对照品难以获得的情况下，采用高效液相色谱法测定特定杂质校正因子的方法，具体是在主成分转化为特定杂质的反应中，通过控制反应条件如稀释溶剂、反应时间、溶液浓度等，以杂质峰面积的增加值为自变量，主成分峰面积的减少值为因变量进行线性回归分析，然后由线性方程的斜率、主成分和待测杂质的相对分子质量及转化反应的摩尔系数计算出特定杂质的校正因子。本发明在对转化反应条件进行考察和优化的基础上，成功测定了头孢地尼原料药中目标杂质的校正因子，取得了满意的结果，与传统方法相比，本发明无需杂质对照品，且结果准确，操作简单，应用范围广阔。

技术领域

本发明属于药物分析技术，特别是涉及一种在杂质对照品难以获得的情况下，采用高效液相色谱法测定特定杂质校正因子的方法。

背景技术

在进行药物的有关物质检查时，多采用高效液相色谱法，其计算方法有外标法、面积归一化法、不加校正因子的自身稀释对照法、加校正因子的自身稀释对照法。其中，加校正因子的自身稀释对照法充分考虑到杂质与主成分在特定波长下紫外响应的差异，定量结果准确可靠，是目前比较常用的杂质定量方法。因此，对于特定杂质的控制，校正因子的研究和测定是非常必要的。

通常，校正因子的测定多采用对照品标准曲线法。将主成分对照品和各杂质对照品配制成一定浓度的储备液，逐步稀释成系列线性溶液。分别进样后按照最小二乘法以响应值(如峰面积)对浓度进行线性回归，绘制主成分和各杂质的线性标准曲线。主成分和各杂质线性方程斜率的比值即为各杂质的校正因子。该方法既验证了主成分和杂质的线性，又可得到准确的校正因子，是目前较为常用的方法。

然而，在实际工作中，杂质对照品的获得通常需要较高成本。除此之外，很多主药的稳定性杂质如光降解杂质往往性质不稳定，难以制备纯度较高的对照品，这给杂质的准确定量带来了较大的难度。因此，迫切需要找到一种方法，能够在杂质对照品无法获得的情况下准确、快速、简便地对杂质的校正因子进行估测，从而实现药物有关物质的有效控制。

部分第3代、4代头孢菌素类药物分子结构中存在顺式甲氧亚氨基，如头孢唑肟、头孢曲松等。该基团对于头孢菌素的抗菌活性起着重要作用，如头孢噻肟(顺式结构)抗菌活性要比反式结构强40～100倍。在光照或亲核试剂的进攻下顺式结构容易转变为反式甲氧亚氨基结构使得药物活性降低。

头孢地尼(Cefdinir)化学名为(6R,7R)-7-[[(2-氨基-4-噻唑基)-(肟基)乙酰基]氨基]-3-乙烯基-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-羧酸，是日本藤泽药品株式会于1988年首次合成的第3代口服头孢类抗菌药物，在水、乙醇或乙醚中不溶。与其他第3代口服头孢菌素相比，头孢地尼口服吸收性好，对β-内酰胺酶具有高度稳定性，抗菌谱广，对革兰氏阳性菌如葡萄球菌属、链球菌属等的抗菌活性明显增强，临床上用于治疗皮肤感染，术后伤口感染，呼吸道感染等。

在光照条件下，头孢地尼分子结构中的顺式甲氧亚氨基可以转变为反式结构，即中国药典中规定的杂质R，如下图所示。然而，杂质R对照品难以合成制备，且市售价格较为昂贵。

因此，本发明以头孢地尼原料药中杂质R校正因子的测定为例，建立了一种在杂质对照品难以获得的情况下采用高效液相色谱法，通过控制反应条件以主成分峰面积的减少值对杂质峰面积的增加值进行线性回归分析，从而进一步测定特定杂质校正因子的新方法。

发明内容

发明目的：针对上述现有技术存在的技术问题，本申请提供了一种在杂质对照品无法获得的情况下准确、快速测定药物中特定杂质校正因子的方法。

技术方案：本发明所述的一种采用高效液相色谱法测定目标杂质校正因子的方法，包括以下步骤：

(1)定义待测化合物中主成分A转化为目标杂质B的反应如下式：

xA→yB+C，