[发明专利]造血干细胞诱导分化为巨核细胞的方法

说明书

本发明提出了式(1)所示化合物在获得巨核细胞和血小板中的用途、获得巨核细胞和血小板的方法及用于造血干细胞诱导分化为巨核细胞的培养基。所述巨核细胞是通过将造血干细胞进行诱导分化而获得的。式(1)所示化合物可以促使造血干细胞向巨核细胞诱导分化，从而提高巨核细胞的分化效率，获得大量巨核细胞，并最终生成血小板，具有广泛地应用前景。

技术领域

本发明涉及生物领域。具体地，本发明涉及造血干细胞诱导分化为巨核细胞的方法。更具体地，本发明涉及式(1)所示化合物在获得巨核细胞及血小板中的用途、获得巨核细胞及血小板的方法及培养基。

背景技术

血小板是血液系统中成熟巨核细胞胞质片段化的活性产物，在机体止血、血栓形成、免疫调节等生理和病理过程中发挥重要作用。血小板减少是再生障碍性贫血、特发性血小板减少性紫癜等血液系统疾病以及放化疗过程中常见的并发症，血小板输注是临床治疗血小板减少的唯一手段。目前，常规血小板制剂主要来源于无偿献血者捐献的全血进行分离制备或采用成分分离制备机采集而来，健康供者来源有限、血小板贮存时间短且易被污染是制约血小板供给的重要因素，很多患者需要反复多次输注血小板进一步导致供需矛盾日益尖锐，因此迫切需要寻求血小板新来源。

血小板的前体细胞是巨核细胞，而巨核细胞则起源于造血干细胞。造血干细胞具有自我复制和更新的能力，能分化成为各类成熟的血细胞。Choi等已经证明，外周血中的CD34⁺细胞在促进巨核细胞生成的培养体系中培养，可诱导生成成熟的巨核细胞，继而分化为血小板前体，前体表达血小板特异性分子：糖蛋白Ⅰb和Ⅱb以及纤维蛋白原，最终生成血小板。研究表明，从外周血中获取多能干细胞，可减少患者损伤，但是诱导效率极低。Bernardi等研究表明，骨髓中分离得到的CD34⁺在含有TPO的无血清培养体系中可以生成巨核细胞，最终生成血小板。但是通过此方法得到的血小板数量少，在临床应用中受到限制。

因此，目前获得巨核细胞及血小板的方法有待改进。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。

在本发明的一个方面，本发明提出了式(1)所示化合物在获得巨核细胞及血小板中的用途。根据本发明的实施例，所述巨核细胞是通过将初始细胞进行诱导分化而获得的。

发明人发现，目前适用于促使造血干细胞诱导分化为巨核细胞的小分子化合物不多，而且有些化合物虽然可以促使生成巨核细胞，但是进一步生成的血小板数量较少。进而，发明人经过深入研究发现，式(1)所示化合物不仅可以促使造血干细胞向巨核细胞诱导分化，提高巨核细胞的分化效率，还可以促使生成血小板，从而获得大量巨核细胞和血小板，具有广泛地应用前景。

需要说明的是，目前，式(1)所示化合物通常用作选择性的、非ATP竞争性的MEK抑制剂。本发明对于式(1)所示化合物的获得方式不作严格限定，可以自行合成或者通过市售获得。根据本发明的优选实施例，式(1)所示化合物通过市售获得，型号为PD0325901。

根据本发明的实施例，上述式(1)所示化合物在获得巨核细胞及血小板中的用途还可以具有下列附加技术特征：

根据本发明的实施例，所述造血干细胞选自外周血造血干细胞、骨髓造血干细胞或者脐带血造血干细胞。造血干细胞的标志物为CD34，从脐带血、外周血和骨髓中分离得到的CD34⁺细胞可以诱导生成巨核细胞，最终生成血小板。根据本发明的优选实施例，造血干细胞选自脐带血造血干细胞。脐带血本身的取材方法简便，细胞分化阶段相对原始，在临床中已经应用于干细胞移植、治疗白血病等。其与外周血造血干细胞和骨髓造血干细胞相比，具有较高的扩增效率，诱导分化的巨核细胞多，具有一定的优势。