[发明专利]一种用于纯化他克莫司的层析柱及他克莫司的纯化方法

说明书

发明人提供了两种用于纯化他克莫司的层析柱及其纯化方法，在层析柱中，由于上层的层析介质中混杂了石墨烯，石墨烯中具有的共轭π电子，可以吸附他克莫司侧链上的存在不饱和π键的烯烃结构，而他克莫司的两个主要类似物杂质：二氢他克莫司和子囊霉素，在并没有烯烃或其他不饱和π键结构，可被层析柱分离。同时还能通过本发明的纯化方法在层析柱上分离色素以及他克莫司另外一个微量同系杂质8‑epi tacrolimus，该杂质的结构和他克莫司一样，有同样的侧链，但侧链上是手性翻转的，解决了行业内的技术难题。

技术领域

本发明涉及药物化学领域，特别涉及一种用于纯化他克莫司的层析柱及他克莫司的纯化方法。

背景技术

他克莫司是一种新型强效的大环内酯类免疫抑制剂，最早由日本藤泽药品工业公司探索研究所于1984年自日本筑波山土壤中分离到的筑波霉菌的发酵液中提取得到；1989年他克莫司首次应用于临床肝脏移植；1991年日本开发的名为普乐可复(Prograf)他克莫司胶囊剂和注射剂正式上市，用于原发性肝移植和肾移植的排斥反应治疗，后又被批准用于骨髓移植。目前他克莫司制剂已在日本、美国、英国、德国、加拿大、丹麦、法国、意大利、西班牙、爱尔兰等80多个国家上市，广泛应用于肝脏、胰腺、肾脏、心脏和肺等实体器官移植后的抗排异治疗。1999年他克莫司软膏投放日本市场，用于治疗成人的特应性皮炎。此外，他克莫司对牛皮癣、银屑病、鱼鳞病、糖尿病、白塞氏病、变应性皮炎、类风湿性关节炎以及多发性硬化病等自身免疫病有疗效。

他克莫司粗品主要来源于发酵产品，发酵过程同时也产生了多个他克莫司类似物，包括二氢他克莫司和子囊霉素。目前主要使用硝酸银的银离子或者大孔吸附树脂结构对这三个主要物质进行分离层析，已有多份专利对此进行了报道和研究，但这两种方法纯化效率不高，需要多步分离纯化，耗材昂贵其需消耗大量溶剂且操作步骤繁琐、价格相对昂贵。

同时，他克莫司还有一种杂质(8-epi tacrolimus)，该杂质结构和他克莫司有同样结构，只是在侧链的不饱和烯烃上是手性翻转的，用常规层析法也难以分离，一直是他克莫司纯化的难点所在。此外发酵提取过程产生的不稳定的同系物杂质，也需要通过层析或者结晶进行分离纯化，但结晶对于一些同系物杂质去除能力有限。

发明内容

为此，需要提供一种他克莫司粗品的纯化方法，不仅能够获得高纯度的他克莫司，且具有较高的纯化收率，从而可降低他克莫司的纯化成本。

为实现上述目的，发明人提供了一种用于纯化他克莫司的层析柱以及使用该层析柱的他克莫司的纯化方法。具体为：

一种用于纯化他克莫司的层析柱，所述层析柱的上部填充第一石墨烯混合介质填料，所述层析柱的下部填充第一层析介质填料；所述层析柱的下部高度占层析柱高的5-10％，所述层析柱的直径与高度比为1:5-25；

所述第一石墨烯混合介质填料为1-50重量份石墨烯粉末和100重量份的第一层析介质填料混合制备，所述石墨烯粉末的粒度为500-5000目，所述第一层析介质填料为层析硅胶或氧化铝。

一种他克莫司的纯化方法，包括以下步骤：

第一待分离液的制备：将他克莫司粗品溶解于乙酸乙酯后，加入非极性烷烃或石油醚，制成第一待分离液；

上样：将第一待分离液上样上述的层析柱，形成含有他克莫司的第一层析柱；

洗脱：用第一洗脱溶剂对第一层析柱进行梯度洗脱，所述第一洗脱溶剂由非极性烷烃或石油醚与乙酸乙酯混合配制，收集他克莫司含量98％以上的洗脱液。

进一步地，所述第一待分离液的制备步骤中，所述他克莫司粗品和乙酸乙酯的质量比为1:4-8；加入非极性烷烃或石油醚的体积为乙酸乙酯体积的15-25％。

进一步地，上样步骤中，所述第一待分离液的添加量为10-40g/L层析柱体积。