[发明专利]检测氯丙那林的酶联免疫试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种检测氯丙那林的酶联免疫试剂盒，它包括：包被有包被原的酶标板、氯丙那林标准品溶液、氯丙那林抗体、酶标二抗、底物显色液、终止液、洗涤液、复溶液，所述包被原为氯丙那林偶联抗原，所述酶标二抗为酶标记的氯丙那林抗抗体。本发明还公开了一种应用上述酶联免疫试剂盒检测氯丙那林的方法，它包括：首先进行样品前处理，然后用试剂盒进行检测，最后分析检测结果。本发明提供的酶联免疫试剂盒可用于检测动物组织和牛血清样本中氯丙那林的含量，其操作简便、费用低廉、灵敏度高、能够现场监控且适合大量样本的筛查。

技术领域

本发明涉及酶联免疫检测技术，具体涉及一种用于检测氯丙那林的酶联免疫试剂盒，可定性、定量检测动物组织和牛血清中氯丙那林药物的残留量。

背景技术

氯丙那林属于β2型受体激动剂，有明显的支气管扩张作用，临床用于治疗支气管炎、喘息性支气管炎等。不法养殖户将氯丙那林添加到动物饮用水或饲料中，用来增加动物的瘦肉率，因此，对于氯丙那林这种新型“瘦肉精”，农业部明确该药物禁用于养殖动物。

目前，常用检测方法有高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱法、气相色谱法、气相色谱 -质谱联用法等。由于以上方法均需先进检测仪器、检测费用昂贵、步骤繁琐、耗时，且对操作人员专业性要求较高，不适用于基层企事业单位的大通量快速筛查检测。本发明应用酶联免疫法，测定动物组织和牛血清中氯丙那林药物的残留量，具有检测限低、特异性强、操作简便、检测速度快、检测成本低，非常容易推广等优点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够检测动物组织和牛血清中氯丙那林药物残留量的酶联免疫试剂盒，并提供一种高效、准确、简便、适于大批量样品筛选的定性、定量检测方法。

本发明试剂盒，它包括：包被有包被原的酶标板、氯丙那林标准品溶液、氯丙那林抗体、酶标二抗、底物显色液、终止液、洗涤液、复溶液，所述包被原为氯丙那林偶联抗原，所述酶标二抗为酶标记的氯丙那林抗抗体。

所述氯丙那林偶联抗原是由氯丙那林半抗原与载体蛋白偶联得到，所述氯丙那林半抗原是由5-(2-溴-2-丙烯-1-基)-1,3-苯并二氧戊环与氨基丙酸反应得到，所述载体蛋白为鼠血清蛋白、甲状腺蛋白、牛血清白蛋白、兔血清蛋白、人血清蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或纤维蛋白原。

所述氯丙那林特异性抗体是以氯丙那林偶联抗原作为免疫原制备获得，所述氯丙那林特异性抗体可为氯丙那林单克隆抗体或氯丙那林多克隆抗体，其中优选氯丙那林单克隆抗体。

所述酶标二抗的标记酶为辣根过氧化物酶或细菌提取碱性磷酸酯酶，其中优选辣根过氧化物酶；酶标二抗是由酶和氯丙那林抗抗体偶联得到的。

为了更方便现场监控和大量样本筛查，所述试剂盒还包括氯丙那林标准品溶液、底物显色液、终止液、洗涤液、复溶液。

所述氯丙那林标准品溶液6瓶，浓度分别为0μg/L，0.1μg/L，0.3μg/L，0.9μg/L，2.7μg/L， 8.1μg/L。

当标记酶为辣根过氧化物酶时，所述底物显色液由底物液A液和底物液B液组成，A为过氧化氢或过氧化脲，B液为邻苯二胺或四甲基联苯胺，所述终止液为1～2mol/L的硫酸溶液或盐酸缓冲液；当标记酶为细菌提取碱性磷酸酯酶时，所述底物显色液为对硝基磷酸盐缓冲液，所述终止液为1～2mol/L氢氧化钠溶液。

所述洗涤液优选为pH值为7.4，含有0.5％～1.0％吐温-20、0.01‰～0.03‰叠氮化钠防腐剂、 0.1～0.3mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比。

所述复溶液优选为pH值为7.0、0.02mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比。