[发明专利]一种检测尿嘧啶-DNA糖基化酶的生物传感器及其制备方法

权利要求书

1.一种检测尿嘧啶-DNA糖基化酶的生物传感器，其特征在于，包括纳米金溶液、Hairpin Probe、Track DNA、拉曼染料、均相反应液；

所述的Hairpin Probe序列如SEQ No.1所示；

所述的Track DNA序列如SEQ No.2所示；

所述的Hairpin Probe和Track DNA的5’端修饰-SH；

所述的均相反应液，包括内切酶IV、外切酶Ⅲ、待测物UDG、缓冲液；

所述的缓冲液为10mM Tris-HCL、50mM NaCl、10mM MgCl₂、1mM DTT，pH=7.9；

所述的生物传感器的制备方法，包括以下步骤：

（1）制备纳米金溶液；

（2）将Hairpin Probe、Track DNA及拉曼染料修饰到金纳米粒子表面，得到修饰后的纳米金溶液；

（3）将修饰后的的纳米金溶液与均相反应溶液混合；

所述的步骤（2），包括以下步骤：

S1 向纳米金溶液中边搅拌边加入拉曼染料溶液；

S2 加入修饰了-SH的底物探针 Hairpin Probe 和 Track DNA，混合均匀；

S3 按照1μL/min的速度加入50 μL PB缓冲液，搅拌均匀，1μL/min的速度加入27 μLPBS缓冲液，4 ℃放置48 h；

S4 按照1μL/min的速度加入62μL PBS缓冲液，搅拌均匀，4 ℃放置；

S5加入灭菌水洗脱未标记上的DNA链，4 ℃保存待用。

2.根据权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，所述的内切酶IV浓度为1 U/mL，所述的外切酶Ⅲ浓度为10U/mL，待测物UDG的浓度为1 U/mL。

3.根据权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，所述的步骤（1）中纳米金溶液的浓度为1 nM。

4.根据权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，所述的步骤（3）的反应条件为37℃，反应时间是1h。

5.根据权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，所述的步骤（3）中拉曼染料的终浓度为0.5-3.0μM。