[发明专利]一种叶酸-二氨基聚乙二醇-蒜酶缀合物及其制备方法

权利要求书

1.一种叶酸-二氨基聚乙二醇-蒜酶缀合物，其结构式如式Ⅰ所示：

式Ⅰ中n为10～30。

2.权利要求1所述叶酸-二氨基聚乙二醇-蒜酶缀合物的制备方法，包含如下步骤：

(1.1)将叶酸和二环己基碳二亚胺在二甲基亚砜中进行活化反应，得到活化产物体系；

(1.2)向所得活化产物体系中加入吡啶和二氨基聚乙二醇进行酰胺化反应，得到酰胺化产物体系；

(1.3)对所得酰胺化产物体系进行透析，得到酰胺化产物溶液；

(2)将蒜酶、磷酸盐缓冲溶液、碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺混合进行活化反应，生成活化产物体系；

(3)将步骤(1.3)所得酰胺化产物溶液和步骤(2)所得活化产物体系混合，调节pH值后进行取代反应，得到叶酸-二氨基聚乙二醇-蒜酶缀合物；

上述步骤1.1～1.3和步骤2无先后顺序限制。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1.1)中叶酸、二环己基碳二亚胺和二甲基亚砜的用量之比为(30～35)g:(25～35)mL:(1～5)mL。

4.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1.1)中活化反应在室温下进行，时间为1～5h。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1.2)中吡啶和二氨基聚乙二醇的用量之比为(110～130)μL:(130～150)mg；

所述二氨基聚乙二醇和步骤(1.1)中叶酸的质量比为(130～150):(30～35)。

6.根据权利要求2或5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1.2)中酰胺化反应在室温下进行，时间为20～30h。

7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中磷酸缓冲液的pH值为7～8；

所述蒜酶、磷酸盐缓冲溶液、碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的用量比为(45～55)mg:(1～3)mL:(15～25)mg:(15～25)mg；

所述蒜酶和步骤(1.1)中叶酸的质量比为(45～55):(30～35)。

8.根据权利要求2或7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中活化反应在室温下进行，时间为1～3h。

9.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中调节pH值为7～8；

所述取代反应在室温下进行，时间为1～3h。