[发明专利]RNA纯化试剂盒及富集miRNA的方法

权利要求书

1.一种RNA纯化试剂盒，其特征在于，所述RNA纯化试剂盒包括酸处理玻璃粉和悬浮溶液，所述酸处理玻璃粉具有325目或更细的粒度，所述悬浮溶液以超纯水为溶质，包含0.2-1M的离液盐和0.05-0.2M的缓冲剂，pH 5-7。

2.权利要求1所述的RNA纯化试剂盒，其特征在于，所述离液盐为氯化锂、硫氰酸钾、高氯酸钠或者它们的组合。

3.权利要求1所述的RNA纯化试剂盒，其特征在于，所述缓冲剂为氯化铵、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、醋酸钠或者它们的组合。

4.权利要求1所述的RNA纯化试剂盒，其特征在于，所述悬浮溶液还包含0.05-2mM的EDTA。

5.根据权利要求4所述的RNA纯化试剂盒，其特征在于，所述悬浮溶液包含0.5M的氯化锂、0.1M的氯化铵和1mM的EDTA。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的RNA纯化试剂盒，其特征在于，所述酸处理玻璃粉和所述悬浮溶液分装在不同的试剂瓶中。

7.根据权利要求1-5中任一项所述的RNA纯化试剂盒，其特征在于，所述酸处理玻璃粉和所述悬浮溶液混合在同一个试剂瓶中形成RNA纯化试剂，所述酸处理玻璃粉和所述悬浮溶液的重量体积比为1g:(3-5)ml。

8.一种从含有总RNA的水溶液中富集miRNA的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)提供含有总RNA的水溶液；

(2)将根据权利要求6所述的RNA纯化试剂盒中的所述酸处理玻璃粉和所述悬浮溶液混合以现配RNA纯化试剂，其中所述酸处理玻璃粉和所述悬浮溶液的重量体积比为1g:(3-5)ml；或者提供根据权利要求7所述的RNA纯化试剂盒的配好的RNA纯化试剂；

(3)向所述含有总RNA的水溶液中加入0.6-1倍体积的所述RNA纯化试剂，混匀，得到第一混合液，在4℃下放置5-15分钟；

(4)将所述第一混合液在4℃、5000-8000rpm下离心5-15分钟，取上清液，加入0.75-1倍体积的异丙醇，并加入10-20μg糖原，得到第二混合液；

(5)将所述第二混合液置于-80℃下至少2h，然后融化，在4℃、10000-15000rpm下离心30-40分钟，弃去上清液；

(6)向所得的沉淀物加入预冷的70％乙醇，混匀，在4℃、10000-15000rpm下离心10-15分钟，弃去上清液；

(7)重复步骤(6)一次，弃去上清液，将底部具有沉淀物的离心管在4000-6000rpm下瞬时离心5s后，使用小量程移液器彻底弃去上清液，室温干燥2-5分钟，得到富集了miRNA的沉淀物；

(8)任选地，向所述富集了miRNA的沉淀物加入适量的焦碳酸二乙酯(DEPC)处理水，室温静置2-5分钟后，混匀，得到富集了miRNA的水溶液。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述提供含有总RNA的水溶液包括：

(A)提供含RNA的样品；

(B)向1体积份的所述含RNA的样品加入2-2.5体积份的Trizol Reagent，混匀，室温静置5-10分钟；

(C)向步骤(B)所得的混合液中加入0.8-1体积份的异丙醇，混匀，室温静置5-10分钟；

(D)将步骤(C)所得的混合液在4℃、10000-15000rpm下离心10-15分钟，取上清液至新的离心管中；

(E)向1体积份的所得上清液加入2-2.5体积份的氯仿，混匀，室温静置5-10分钟；

(F)将步骤(E)所得的混合液在4℃、10000-15000rpm下离心10-15分钟，取上清液至新的离心管中；

(G)重复步骤(E)和(F)一次，得到所述含有总RNA的水溶液。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述含RNA的样品为血浆或者血清。