[发明专利]一种鳗鲡爱德华菌噬菌体的制备方法、微生态制剂和应用

说明书

本发明提供了一种鳗鲡爱德华氏菌噬菌体的制备方法、微生态制剂和应用，属于鳗鲡养殖技术领域，所述鳗鲡爱德华氏菌噬菌体的制备方法，包括以下步骤：1)将鳗鲡爱德华氏菌接种于液体培养基中进行发酵培养获得发酵菌液；2)向步骤1)中所述发酵菌液中接入所述鳗鲡爱德华氏菌的噬菌体获得噬菌体培养体系，进行噬菌体培养；3)当所述噬菌体培养至10～20h时，开始向噬菌体培养体系中流加爱德华氏菌菌液；使所述噬菌体培养体系中爱德华氏菌的菌浓度为10⁸～10¹⁴CFU/ml；4)当所述噬菌体培养至18～24h时结束培养，获得鳗鲡爱德华氏菌噬菌体。所述方法操作简单，培养周期短，获得的噬菌体效价高。

技术领域

本发明属于鳗鲡养殖技术领域，尤其涉及一种鳗鲡爱德华氏菌噬菌体的制备方法、微生态制剂和应用。

背景技术

鳗鲡是一种江河性洄游鱼类，原产于海中，上溯到淡水内长大，后回到海中产卵。每年春季，大批幼鳗(也称白仔、鳗线)成群自大海进入江河口。鳗鲡肉质细嫩，味美，在鳗鲡的肉质里，含有丰富的蛋白质、维生素A、D、E、矿物质以及不饱和脂肪酸DHA/EPA；能提供人类生长、维持生命所需的营养成分。

由于鳗鲡具有非常高的营养价值，鳗鲡养殖业发展迅速；我国的鳗鲡养殖业已成为水产品出口创汇的重要产业之一。爱德华氏菌病是鳗鲡养殖的主要疾病之一，主要表现为肝肾肿大或溃烂。爱德华氏菌的传统治疗方法是口服氯霉素，但氯霉素中含有与抑制骨髓造血机能有关的NO₂基团，会对人体健康产生危害，现已经被禁止使用。噬菌体治疗在安全性方面比抗生素更具优势。

但是现有噬菌体的制备方法培养周期长；制备获得的噬菌体效价低。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种鳗鲡爱德华氏菌噬菌体的制备方法和应用；所述方法培养周期短，培养获得的噬菌体效价高。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

一种鳗鲡爱德华氏菌噬菌体的制备方法，包括以下步骤：

1)将鳗鲡爱德华氏菌接种于液体培养基中进行发酵培养获得发酵菌液；

2)向所述步骤1)中所述发酵菌液中接入所述鳗鲡爱德华氏菌的噬菌体获得噬菌体培养体系，进行噬菌体培养；

3)当所述噬菌体培养至10～20h时，开始向噬菌体培养体系中连续流加爱德华氏菌菌液；使所述噬菌体培养体系中爱德华氏菌的菌浓度为10⁸～10¹⁴CFU/ml；

4)当所述噬菌体培养至18～24h时结束培养，获得鳗鲡爱德华氏菌噬菌体发酵液。

优选的，步骤3)中所述连续流加爱德华氏菌菌液时间为4～10h；所述连续流加爱德华氏菌菌液的总体积为所述噬菌体培养体系体积的5～20％。

优选的，步骤2)中所述接入的噬菌体的体积为发酵菌液体积的1～10％。

优选的，步骤2)中所述接入的噬菌体的效价为10⁸～10¹²PFU/ml。

优选的，步骤2)中所述噬菌体培养的温度为24～32℃，所述噬菌体培养的过程中伴随搅拌，所述搅拌的转速为100～220rpm。

优选的，步骤1)中所述的发酵菌液中爱德华氏菌的菌浓度为10⁸～10¹⁴CFU/ml。

优选的，步骤1)中所述的液体培养基包括以下组分：

脑心浸粉1～20g/L；蛋白胨1～20g/L；D-葡萄糖1～10g/L；磷酸二氢钠1～5g/L；氯化钠1～10g/L；所述液体培养基的pH值为7.0～8.0。