[发明专利]针对人呼吸道合胞病毒(HRSV)的N抗原的特异性单克隆抗体，可用于治疗感染、其检测和诊断

说明书

本发明涉及单克隆抗体或其片段，其识别人呼吸道合胞病毒(RSV)的N(核衣壳)蛋白，可用于诊断RSV感染的方法的开发，以及用于治疗、保护和/或预防RSV感染的药物组合物的生产。

技术领域

本发明涉及单克隆抗体或其片段，其识别人呼吸道合胞病毒(RSV)的N(核衣壳)蛋白，可用于RSV感染的诊断方法的开发，以及目的在于RSV感染的治疗、保护和/或预防的药物组合物的生产。

背景技术

急性呼吸道感染是全世界儿科住院和死亡的主要原因(Bryce et al.,2005)。在寒冷的月份期间，由病毒引起的呼吸道感染变得更加急性，并且引起病例数量的增加，呈现暴发流行的特征的情况。导致这些在儿科人群中流行的病毒主要是人呼吸道合胞病毒(hRSV)、腺病毒(ADV)、流感病毒以及偏肺病毒(hMPV)。然而，RSV是世界范围内婴幼儿急性呼吸道感染的主要病原体，在冬季月份中导致了严重的爆发。根据WHO，这种病毒每年感染6400万人，其中160,000人死亡。由这种病毒引起的感染导致了大范围的临床症状，其可以是轻度的，诸如鼻炎或可以严重得多，诸如肺炎或细支气管炎，最严重的状况可以在婴幼儿、早产儿、先天性心脏病患儿和免疫抑制患者中观察到(Cabalka,2004；Carpenter andStenmark,2004；Weisman,2003)。此外，由这种病毒引起的感染是极其频繁和反复的，因为几乎100％的大于三岁的儿童已经出现过至少一次RSV感染的发作(Bont et al.,2002；Hall et al.,1991)。因为这种感染不会留下足够的免疫记忆(Bont et al.,2002)，再感染是频繁的，随着患者年龄的增加，严重程度降低。然而，再感染的个体会充当贮主，并且是小于1岁儿童的传染的源头，这些儿童确实产生严重的呼吸道症状。在智利，在寒冷的月份期间(五月-八月)，这种病毒是需要住院的下呼吸道急性感染的70％的原因(etal.,2003)，导致了他们中的0.1％死亡。尽管这个百分比是低的，但是大量的病例使死亡数非常显著。这种情况导致了紧急护理服务的饱和，这经常要求在健康服务中紧急措施的应用，诸如住院的儿科患者的病床转换，中止选择和计划的手术以及在爆发发生的几个月的期间内雇用支持人员。通常用于医院护理服务的RSV诊断方法是基于通过鼻咽分离物直接免疫荧光法检测病毒抗原的诊断测试。测试的局限性在于对于处理和分析样品的训练的人员的需求以及，此外，所述测试的结果不是立即获得的事实，留下了一段时间，在这段时间内患者仍没有被诊断，但是感染继续其进程。面对此种问题，高效的单克隆抗体的开发，其可以被用于创建选择性的hRSV检测测试，其需要最少的训练并且快速执行(诸如免疫色谱法测试)似乎是满足这一需求的必要的替代选择，因为它们允许对hRSV感染的患者的样本中的病毒抗原的特异性识别，而且需要低的样本数量。以这种方式，本发明转化为能够以非常高效的、有效的方式以及以少量抗原存在下检测hRSV抗原的抗体，这允许对于hRSV感染的患者的快速、有效和准确的检测和诊断的替代方法的开发，以确定影响疾病进展的早期和适当的治疗。

从治疗的角度来看，目前用于预防在最脆弱的人群中潜在更严重的hRSV感染的病例的唯一的标准方案是使用帕利珠单抗(Palivizumab)(Olchanski,et.Al.,2018)。这是针对hRSV的另一种蛋白质，F蛋白，的人源化的单克隆抗体。此类抗体的作用机制是使病毒进入靶细胞中和，所以这需要在冬季期间内的多次给药。由于这种抗体识别病毒的高度可变的表面蛋白，一些株不能被这种抗体识别，使其使用无效。作为这类问题的替代解决方案，发明人已经证明了本发明的抗-蛋白N抗体在预防由hRSV感染的肺部表现的发展也是有效的，这使建议使用其用于制备目的在于治疗和/或预防hRSV感染的药物组合物成为可能。这种新抗体具有附加的优势，N蛋白(Collins et.Al,2013)比F蛋白的更低的变异性，因此允许更多的病毒株的识别。

附图说明

图1：通过杂交瘤产生抗N抗体的验证