[发明专利]用于表征药物产品杂质的系统和方法

说明书

提供了用于表征低分子量(LMW)蛋白质药物产品杂质的系统和方法。一个实施方案使用结合质谱分析的亲水相互作用色谱法(HILIC)。在从所述蛋白质药物产品，例如抗体药物产品中除去N‑连接的聚糖后，通过分子量种类的大小确定自HILIC柱的LMW杂质洗脱。在一些实施方案中，在变性条件下进行所述HILIC分离，使得使用这种方法进行的LMW形式检测与SDS‑PAGE和CE‑SDS方法两者具有高度可比性。LMW药物产品杂质包括但不限于轻链、半抗体、H2L、H2、HL、HC、肽主链截短的种类以及它们的组合。

技术领域

本发明总体上涉及蛋白质分离方法和细胞培养方法。

发明背景

在过去的二十年中，单克隆抗体(mAb)已成功地用于靶向广泛范围的治疗领域(Walsh G.,Nature biotechnology,32:992-1000(2014)；Lawrence S.Naturebiotechnology,25:380-2(2007))。尽管mAb具有由两个二硫键连接的重链组成的保守共价异四聚体结构，每个重链通过二硫键与轻链共价连接，但是即使在大量纯化步骤之后，这些蛋白质也通常含有低水平的产品相关的杂质。低分子量(LMW)种类(例如肽主链截短的片段)和高分子量(HMW)种类(例如抗体二聚体种类)两者均是产品相关的杂质的实例，所述杂质导致mAb产物的大小异质性。由于蛋白质聚集而在治疗性mAb药物产品中形成HMW种类可能潜在地损害药物功效和安全性(例如引发不想要的免疫原性应答)(Rosenberg AS.TheAAPS journal,8:E501-7(2006)；Moussa EM,等人Journal of pharmaceutical sciences,105:417-30(2006))。任何治疗性蛋白质的LMW种类都可能由产生过程中的宿主细胞蛋白酶活性引起。相对于抗体的单体形式，LMW种类通常具有低活性或实质上降低的活性，同时暴露可在体内导致免疫原性或潜在影响药代动力学性质的新表位(Vlasak J,IonescuR.mAbs,3:253-63(2011))。因此，HMW种类和LMW种类两者均被视为关键质量属性，在药物开发过程中并在制造过程中作为纯化药物物质的释放测试的一部分定期监测所述关键质量属性。