[发明专利]用于表征药物产品杂质的系统和方法

权利要求书

1.一种用于在包含蛋白质药物和赋形剂的蛋白质药物产品中表征低分子量杂质的方法，所述方法包括：

i)使所述蛋白质药物产品的样品去糖基化；

ii)通过亲水相互作用色谱法分离所述蛋白质药物产品样品的蛋白质组分；

iii)通过质谱法分析所述分离的蛋白质组分以表征所述蛋白质药物产品样品中的低分子量蛋白质药物产品杂质。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述蛋白质药物产品样品来自补料分批培养物。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述蛋白质药物产品选自由以下组成的组：抗体、融合蛋白、重组蛋白或它们的组合。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述低分子量蛋白质药物产品杂质被表征为选自由以下组成的组的低分子量蛋白质药物产品杂质：自由轻链、半抗体、H2L、H2、HL、HC或它们的组合。

5.一种产生抗体的方法，所述方法包括：

i)在细胞培养物中培养产生所述抗体的细胞；

ii)从所述细胞培养物获得样品；

iii)根据如权利要求1所述的方法表征并定量所述样品中的低分子量杂质，以及

iv)修改所述细胞培养物的一种或多种培养条件以减少在所述抗体的细胞培养过程中产生的表征的低分子蛋白质药物杂质的量。

6.如权利要求5所述的方法，其中经改变以减少低分子量蛋白质药物杂质的量的所述细胞培养物的所述一种或多种条件选自由以下组成的组：pH、细胞密度、氨基酸浓度、重量克分子渗透压浓度、生长因子浓度、搅拌、气体分压、表面活性剂或它们的组合。

7.如权利要求5所述的方法，其中所述细胞选自由以下组成的组：细菌细胞、酵母细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、COS细胞、视网膜细胞、Vero细胞、CV1细胞、肾细胞、HeLa细胞、HepG2细胞、WI38细胞、MRC 5细胞、Colo25细胞、HB 8065细胞、HL-60细胞、淋巴细胞、A431(表皮)细胞、U937细胞、3T3细胞、L细胞、C127细胞、SP2/0细胞、NS-0细胞、MMT细胞、干细胞、肿瘤细胞以及源自上述细胞中的任一种的细胞系。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述CHO细胞是CHO K1、DXB-11 CHO或Veggie-CHO。

9.如权利要求7所述的方法，其中所述COS细胞是COS-7。

10.如权利要求7所述的方法，其中所述肾细胞是HEK293、293EBNA、MSR 293、MDCK、HaK或BHK21。

11.如权利要求7所述的方法，其中所述淋巴细胞是自体T细胞、Jurkat(T淋巴细胞)或Daudi(B淋巴细胞)。

12.如权利要求5-11中任一项所述的方法，其中所述细胞是杂交瘤细胞或四源杂交瘤细胞。

13.一种抗体，所述抗体通过如权利要求5-12中任一项所述的方法产生。

14.如权利要求13所述的抗体，所述抗体包含0.05％与30.0％(w/w)的低分子量蛋白质药物杂质。

15.一种用于表征低分子量药物杂质的系统，所述系统用于权利要求1所述的方法，所述系统包括：

亲水相互作用液相色谱系统，所述亲水相互作用液相色谱系统包括连接至至少两个流动相柱的亲水相互作用液相色谱(HILIC)柱，其中所述HILIC柱与质谱系统处于流体连通。

16.根据权利要求1-4中任一项所述的方法用于蛋白质药物产品的稳定性确定和强制降解研究的用途。

17.根据权利要求15所述的系统用于蛋白质药物产品的稳定性确定和强制降解研究的用途。