[发明专利]具有复制子颗粒和油佐剂的疫苗

说明书

本发明涉及使用α病毒‑复制子RNA颗粒和油佐剂针对动物病原体的接种。涉及疫苗和试剂盒，其包含所述复制子颗粒和所述油佐剂。还涉及制备和使用所述疫苗和所述试剂盒的组分的方法和用途。

技术领域

本发明涉及使用α病毒-复制子RNA颗粒和油佐剂针对动物病原体的接种。涉及疫苗和试剂盒(kit of parts)，其包含所述复制子颗粒和所述油佐剂。还涉及制备和使用所述疫苗和所述试剂盒的组分的方法和用途。

背景技术

多年来，已在疫苗中使用多种载体策略，以努力针对动物病原体产生保护作用。一种这样的载体策略包括使用α病毒衍生的复制子RNA颗粒(RP)[Vander Veen等，AnimHealth Res Rev.13(1):1-9(2012)doi:10.1017/S1466252312000011；Kamrud等，J GenVirol.91(Pt 7):1723-1727(2010)]，其是由几种不同α病毒开发而成，包括委内瑞拉马脑炎病毒(VEE)[Pushko等，Virology 239:389-401(1997)]、辛德毕斯(Sindbis)病毒[Bredenbeek等，Journal of Virology 67:6439-6446(1993)]和塞姆利基森林病毒(Semliki Forest virus)[Liljestrom和Garoff,Biotechnology(NY)9:1356-361(1991)]。编码的病原体抗原在其感染人或动物靶细胞后由复制子颗粒表达。结果是诱导针对表达的抗原的保护性抗体。当与一些传统疫苗制剂比较时，RP具有有吸引力的安全性和功效性质[Vander Veen等，Anim Health Res Rev.13(1):1-9(2012)]。RP平台是几种USDA许可的疫苗的基础，包括：猪流行性腹泻疫苗，RNA颗粒(产品代码19U5.P1)、猪流感疫苗，RNA(产品代码19A5.D0)、禽流感疫苗，RNA(产品代码19O5.D0)和处方产品，RNA颗粒(产品代码9PP0.00)。

α病毒衍生的复制子RNA颗粒缺乏α病毒结构蛋白基因，但是保留了胞质RNA自我扩增必需的复制元件，并且在高活性26Sα病毒亚基因组启动子的驱动下表达插入的异源核酸。因此，RP是单周期感染性颗粒，由于缺乏结构蛋白基因使得其是复制缺陷的。[Lundstrom,Vaccines 6:2392-2415(2014)]。因此，反而必须在适宜的宿主细胞中提供包装和生产复制子颗粒所必需的结构蛋白，以产生RP[参见Vajdy等，Immunol.and CellBiol.82:617-627(2004)]。通常通过复制子RNA和编码结构蛋白的一种或多种“辅助”RNA的瞬时共转染来提供结构蛋白。或者，可以由包装细胞系产生RP，包装细胞系由一个或多个DNA表达盒组成型或瞬时表达病毒结构蛋白。这样，产生的复制子颗粒保留了载体的复制缺陷性质，因为结构蛋白不包括在所得到的RP基因组中[Polo等，Dev.Biol.,104:181–185(2000)]。当用于免疫目标人类或动物时，这些复制缺陷的α病毒RNA复制子颗粒在体内诱导保护性免疫应答。例如，在全身性免疫小鼠和大动物后，基于VEE的α病毒载体激发较强的粘膜和全身性免疫应答[Davis等，IUBMB Life 53:209-211(2002)]。

佐剂是能够对目标人类或动物的免疫系统提供非特异性刺激的已知化合物。佐剂的标准用途是在基于灭活或亚单位抗原的疫苗中。存在多种佐剂类型和组分，例如：铝盐(氢氧化铝或磷酸铝)、脂质体、葡聚糖、海藻酸盐(alginate)、细菌组分(如细胞壁组分)、矿物油或非矿物油、合成佐剂(如：非离子嵌段聚合物)、聚胺(如硫酸葡聚糖)、Carbopol^TM、吡喃和皂苷(如：Quil A^TM或Q-vac^TM)。可以将皂苷和疫苗组分组合在ISCOM^TM中。

此外，诸如胞壁二肽、二甲基甘氨酸、特夫素(tuftsin)的肽通常作为佐剂。类似地，组合产品如ISA^TM组合物(Seppic,France)。