[发明专利]含有Fc区的条件性活化的结合部分

说明书

本文提供了含有Fc区的条件性活化的结合蛋白的组合物，以及用于共表达和纯化此类条件性活化的结合蛋白的方法。还提供了通过向患者施用所述条件性活化的结合蛋白来治疗癌症的方法。

相关申请的交叉引用

本申请要求2017年9月8日提交的美国临时申请号62/555,999和2017年9月8日提交的美国临时申请号62/555,943的权益，所述申请的公开内容以引用的方式整体并入本文。

背景技术

在各种临床环境中，通常需要选择性破坏单独细胞或特定细胞类型。例如，癌症疗法的主要目标是特异性地破坏肿瘤细胞，同时使健康的细胞和组织尽可能完整无损。一种这样的方法是通过诱导针对肿瘤的免疫应答以使诸如自然杀伤(NK)细胞或细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的免疫效应细胞攻击并破坏肿瘤细胞。

完整单克隆抗体(MAb)(其为肿瘤相关抗原提供优异的结合特异性和亲和力)的使用已成功应用于癌症治疗和诊断领域。然而，完整MAb的大尺寸、它们的较差生物分布以及在血池中持久存在限制了它们的临床应用。例如，完整抗体可以在肿瘤区域内表现出特异性累积。在生物分布研究中，当精确检查肿瘤时，注意到在周边区域存在不均匀的抗体分布与原始累积。由于肿瘤坏死、不均匀的抗原分布和增加的间质组织压力，不可能用完整抗体构建体到达肿瘤的中心部分。相比之下，较小的抗体片段显示出快速肿瘤定位、更深地渗透到肿瘤中并且也相对快速地从血流中清除。

源自亲本MAb的小结合结构域的单链片段(scFv)对于临床应用提供比完整MAb更好的生物分布，并且可以更有效地靶向肿瘤细胞。单链片段可以有效地由细菌工程化，然而，大多数工程化的scFv具有单价结构，并且由于缺乏二价化合物所具有的亲合力而显示与其亲本MAb相比降低的肿瘤累积(例如，在肿瘤细胞上的短驻留时间)和特异性。

尽管scFv具有有利的特性，但是某些特征阻碍了其在癌症化疗中的完全临床部署。特别值得注意的是由于这些剂靶向到患病和健康组织两者共同的细胞表面受体而使其在患病与健康组织之间具有交叉反应性。具有改善的治疗指数的ScFv将提供这些剂的临床使用的显著进步。本发明提供了此类改善的scFv及其制造和使用方法。本发明的改善的scFv具有克服缺乏亲合力的意料之外的益处，其通过单个单元形成二聚体化合物来证明。

发明内容

在一方面，本文提供了一种异源二聚体蛋白组合物，其包含：(a)第一单体，所述第一单体从N-末端至C-末端包含：(i)结合至第一肿瘤靶抗原(TTA)的第一抗原结合结构域；(ii)结构域接头；(iii)包含以下的受约束的Fv结构域：(1)包含vhCDR1、vhCDR2和vhCDR3的可变重结构域；(2)受约束的不可裂解的接头；和(3)包含vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3的可变轻结构域；(iv)第一可裂解的接头；和(v)第一Fc结构域；以及(b)第二单体，所述第二单体从N-末端至C末端包含：(i)包含以下的伪Fv结构域：(1)伪可变重结构域；(2)不可裂解的接头；和(3)伪可变轻结构域；(ii)第二可裂解的接头；和(iii)第二Fc结构域，其中所述第一Fc结构域和第二Fc结构域包含杵臼修饰(knob-in-hole modification)，并且其中受约束的Fv结构域在可裂解的接头处不存在裂解的情况下不结合人CD3。在一些实施方案中，第一单体还包含第二抗原结合结构域，其结合至在第一可裂解的接头的N-末端处的第二肿瘤靶抗原(TTA)。

在某些实施方案中，所述可变重链包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列。在一些情况下，所述可变重结构域包含vhFR1-vhCDR1-vhFR2-vhCDR2-vhFR3-vhCDR3-vhFR4。

在一些实施方案中，所述可变轻结构域包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列。在某些情况下，所述可变轻结构域包含vlFR1-vlCDR1-vl FR2-vlCDR2-vlFR3-vlCDR3-vlFR4。