[发明专利]人工脂肪组织及其制造方法、人工皮肤的制造方法以及脂肪细胞的培养试剂

说明书

本发明公开一种人工脂肪组织，其由含有包含脂肪细胞的细胞和经片段化的细胞外基质的三维组织体形成。

技术领域

本发明涉及人工脂肪组织及其制造方法、人工皮肤的制造方法以及脂肪细胞的培养试剂。

背景技术

成熟脂肪细胞在体外的长期培养维持是化妆品/药品检测或整形手术的领域中特别重要的课题之一。平皿上的现有二维培养的培养时间短，脂肪细胞大部分会在1周后发生去分化。根据现有的报告，单眼成熟脂肪细胞无法维持1周以上(非专利文献1)。另外，在某种程度以上成熟了的脂肪细胞中，由于该细胞内的脂肪滴的影响而有自培养皿漂浮的倾向，因而培养基的更换是困难的。

为了解决这些课题，三维细胞培养技术受到关注。WAQAR HASSAN等人在由以PEG为基底的共聚物和透明质酸构成的水凝胶中将细胞制成胶囊并进行培养(非专利文献2)。但是，该方法由于是将细胞进行分离培养，因此细胞之间的物理接触难，分化效率差。

DAQUINAG等人验证了利用以磁纳米粒子为基础的三维立体结构培养系统，并使用小鼠3T3-L1前脂肪细胞及GFP表达小鼠内皮细胞，同时模拟血管新生和脂质生成。脂肪细胞与内皮细胞的共培养虽然通过免疫染色完美地可见，但14天后的脂肪囊泡非常地小、成熟度低(非专利文献3)。

另一方面，就含有脂肪细胞的皮肤模型而言，报告了使用牛I型胶原水凝胶(3mg/mL)、成纤维细胞及脂肪干细胞的2层结构的皮肤模型，但用于皮肤模型构筑的培养需要56天～63天这样非常长的期间。另外，厚度也比人的皮肤薄(非专利文献4)。

另外，还报告了利用重悬于人冻干血浆水凝胶(1mg/mL纤维蛋白原)而成的成纤维细胞、或间充质干细胞和脂肪细胞的3层结构得到的皮肤模型，但模型构筑不仅需要35天这样长的培养工艺，而且在形态上也无法模拟人的皮肤结构，是非常薄的(非专利文献5)。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：Toda S,Uchihashi K,Aoki S,et al.,Organogenesis.2009 5(2):50-56

非专利文献2：WAQAR HASSAN ET AL.,STEM CELL RESEARCHTHERAPY 2013,21；4(2):32

非专利文献3：DAQUINAG,ET AL.,TISSUE ENGINEERING.PART C,METHODS,2013May；19(5):336-44.

非专利文献4：TROTTIER ET AL.,STEM CELLS,2008 Oct；26(10):2713-23

非专利文献5：MONFORT ET AL.,J Tissue Eng Regen Med.,2013 Jun；7(6):479-90

发明内容

发明要解决的技术问题

本发明一实施方式的目的在于提供能够长期间维持的人工脂肪组织及能够在短时间内制造该人工脂肪组织的制造方法。进而，本发明一实施方式的目的还在于提供含有能够长期间维持的人工脂肪组织的人工皮肤以及能够在短时间内制造该人工皮肤的制造方法。本发明一实施方式的目的还在于提供脂肪细胞的培养试剂及使用上述人工皮肤对化合物的皮肤渗透性进行评价的方法。

用于解决技术问题的手段

本发明人们发现，通过将作为悬浮细胞的脂肪细胞与经片段化的细胞外基质一起进行培养而形成三维组织体，脂肪细胞在短时间内进行分化，且由所形成的三维组织体构成的人工脂肪组织能够长期间维持。进而发现，通过使用该人工脂肪组织，能够制造接近于人的皮肤厚度的人工皮肤。

即，本发明例如提供以下的[1]～[29]。