[发明专利]视黄醇的生产

权利要求书

1.一种产生类胡萝卜素的宿主细胞，所述宿主细胞包含视黄醇脱氢酶[EC1.1.1.105]，优选地异源视黄醇脱氢酶，所述宿主细胞产生包含视黄醛和视黄醇的类视黄醇混合物，其中与所述类视黄醇混合物中存在的视黄醛的量相比，视黄醇的百分比是至少约90％，优选地92％、95％、97％、98％、99％或甚至100％。

2.根据权利要求1所述的产生类胡萝卜素的宿主细胞，其中要经由所述视黄醇脱氢酶的作用而被还原的视黄醛包括反式视黄醛和顺式视黄醛的混合物，其中所述视黄醛混合物中的反式视黄醛的百分比在至少约61％至98％，优选地至少约61％至95％，更优选地至少约61％至90％的范围内。

3.根据权利要求1或2中任一项所述的产生类胡萝卜素的宿主细胞，其中所述视黄醇脱氢酶选自真菌，优选地镰刀菌属(Fusarium)，更优选地所述视黄醇脱氢酶是藤仓镰刀菌(Fusarium fujikuroi)视黄醇脱氢酶(FtRDH)。

4.根据权利要求3所述的产生类胡萝卜素的宿主细胞，其中所述FtRDH选自与根据SEQID NO:1的多肽具有至少约60％同一性的多肽。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的产生类胡萝卜素的宿主细胞，其中所述宿主细胞选自植物、真菌、藻类或微生物，诸如选自埃希氏菌属(Escherichia)、链霉菌属(Streptomyces)、泛菌属(Pantoea)、芽孢杆菌属(Bacillus)、黄杆菌属(Flavobacterium)、聚球藻属(Synechococcus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、棒状杆菌属(Corynebacterium)、微球菌属(Micrococcus)、Mixococcus、短杆菌属(Brevibacterium)、慢生根瘤菌属(Bradyrhizobium)、戈登氏菌属(Gordonia)、迪茨氏菌属(Dietzia)、鼠尾菌属(Muricauda)、鞘脂单胞菌属(Sphingomonas)、集胞藻属(Synochocystis)、副球菌属(Paracoccus)、酵母属(Saccharomyces)、曲霉属(Aspergillus)、毕赤酵母属(Pichia)、汉逊酵母属(Hansenula)、须霉属(Phycomyces)、毛霉属(Mucor)、红酵母属(Rhodotorula)、掷孢酵母属(Sporobolomyces)、法夫酵母属(Xanthophyllomyces)、发夫酵母属(Phaffia)和布拉霉属(Blakeslea)；优选地选自真菌，包括酵母，更优选地选自酵母属、曲霉属、毕赤酵母属、汉逊酵母属、须霉属、毛霉属、红酵母属、掷孢酵母属、法夫酵母属、发夫酵母属、布拉霉属和耶氏酵母属(Yarrowia)，最优选地选自解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)或酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。

6.根据前述权利要求中任一项所述的产生类胡萝卜素的宿主细胞，其中所述视黄醇被进一步转换为维生素A。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的产生类胡萝卜素的宿主细胞，所述宿主细胞还包含选自果蝇属的立体选择性β-胡萝卜素氧化酶，所述立体选择性β-胡萝卜素氧化酶催化β-胡萝卜素转换为视黄醛混合物，其中基于所述混合物中的视黄醛的总量，所述混合物包含至少约61％，优选地68％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或至多100％的反式同种型视黄醛，更优选地选自与根据SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％同一性的序列。

8.一种经由视黄醇脱氢酶[EC 1.1.1.105]的酶促活性生产包含视黄醇和视黄醛的类视黄醇混合物的方法，所述方法包括使视黄醛与所述视黄醇脱氢酶接触，其中所述类视黄醇混合物中视黄醇与视黄醛的比值为至少约9:1。