[发明专利]评估抗体-药物缀合物的方法

说明书

本公开提供了评估ADC产品的DAR的方法，这些方法提供相对于已知方法的优势。具体地，本公开的方法可以在高通量的应用中和/或在评估期间无需稀释ADC样品的情况下使用。

相关申请的交叉引用

本申请要求2017年9月8日提交的美国临时专利申请号62/556,153的优先权，该临时专利申请的内容通过引用并入本文。

背景技术

抗体-药物-缀合物(ADC)是一类新兴的药物分子。它们定位到特异性靶标并递送有效药物的能力使其成为开发基于靶标的治疗产品的有吸引力的选择。ADC是通过将有效药物分子与单克隆抗体化学接头来产生的。与单克隆抗体缀合的药物分子的平均数量称为药物与抗体之比(“DAR”)。DAR是ADC产品的重要质量属性，因为它会影响产品的功效、安全性和/或稳定性。因此，以可靠且高通量的方式评估ADC产品的DAR的方法是可取的。

具体实施方式

本公开提供了评估ADC产品的DAR的方法，这些方法提供相对于已知方法的优势。具体地，本公开的方法可以在高通量的应用中和/或在评估期间无需稀释ADC样品的情况下使用。

紫外-可见(UV-Vis)和比尔-朗伯(Beer-Lambert)定律

DAR传统上是使用UV-Vis光谱法测量的(参见例如，Chen,MethodsMol.Biol.1045:267-73(2013))。该分析的基础是比尔-朗伯定律，即物质的吸光度与浓度之间的正比关系：

A＝εcl，

其中A是吸光度，ε是消光系数(物质的物理常数)，l是穿过含有细胞的分析物的路径长度，并且c是浓度。

使用UV-Vis光谱法对ADC产品进行DAR测量依赖于抗体的最大吸收(例如，280nm)与药物的最大吸收(例如，252nm)之差。例如，平均DAR可以使用缀合材料在280nm和252nm处测量的吸收的差来计算。尽管UV-Vis方法已在工业中广泛使用，但它缺少进行配制筛选研究所需的通量。它在不进行样品稀释的情况下无法使用，从而导致与样品稀释有关的误差。

因此，本公开至少部分地基于使用尺寸排阻色谱法(例如，UPLC)和斜率光谱法测量DAR的替代方法。对这些方法进行了表征，并在再现性、精密度和灵敏度方面与UV-Vis光谱法进行了比较。生成的数据支持使用基于UPLC的DAR方法来克服传统UV-Vis方法的通量限制。此外，基于斜率光谱法的方法可用于在不进行样品稀释的情况下分析ADC样品。

基于UPLC的方法

在一个实施方案中，尺寸排阻用于确定DAR。在一些实施方案中，本文公开的方法包括将包含抗体-药物缀合物的样品施加于尺寸排阻色谱基质。在一些实施方案中，本文公开的方法包括施加包含抗体-药物缀合物的样品并通过尺寸排阻色谱基质运行包含抗体-药物缀合物的样品。在一些实施方案中，将ADC样品的总量施加于尺寸排阻基质以进行分析。例如，以下基于UPLC的方法用于评估DAR。

使用Empower的Apex Track积分方法以及峰肩检测对280nm处收集的数据进行积分。保留时间积分范围因分子而异，但通常在3-9分钟内。具有最大高度和面积的峰被归类为“天然”、“主”或“单体”峰。早于“天然”峰洗脱的任何峰均归类为“HMW”峰。晚于“天然峰”洗脱的任何峰均归类为“LMW”峰。

从各个峰的面积与所有峰的总面积之比计算每个种类的相对百分比。以下的相对百分比面积报告为纯度的指标：总HMW％、天然(或主或单体)天然％或总LMW％。对所有峰的总面积求和并用于随后的DAR计算中。然而，在一些实施方案中，仅使用天然峰的面积。