[发明专利]免疫组织化学抗原成像标尺外推方法

权利要求书

1.一种用于IHC成像外推的方法，通过该方法从二级哺乳动物IgG和抗原浓度的已知梯度密度靶标系列形成抗原浓度标尺，包括以下步骤：

(a)将显微镜载片暴露于由抗体组成的一级染色试剂；

(b)将所述抗体捕获到其匹配的抗原靶标上；

(c)采用二级染色试剂盒在步骤(a)中的所述抗体与所述二级靶标阵列之间进行结合，用于抗原识别；

(d)通过色原沉淀使步骤(c)中所识别的的抗原着色；以及

(e)计算/比较颜色密度；

其中，

所述显微镜载片包括检测区和对照区，其中

所述检测区是组织切片或疏松细胞的空间，可用于通过免疫组织化学(IHC)处理并随后进行检查；以及

所述对照区包括两个二级哺乳动物IgG阵列，以及可选的一组或多组以一定比例固定到所述载片的抗原阵列。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述抗体是小鼠IgG或家兔IgG抗体。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所有所述抗原和二级哺乳动物IgG加样点可以是任何规则或不规则形状，例如圆形，椭圆形，正方形，菱形等。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，所述抗体可以选自任何IHC认可的使用小鼠或家兔宿主蛋白的抗体，所述蛋白也不与荧光标记物结合或与酶位点(例如HRP或AP)整合。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，所述二级染色剂可以选自具有1x至25x的酶增益的二级染色剂，所述二级染色剂各自在小鼠和家兔之间是唯一独立的，其各自使用不同的颜色色原。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，所述方法可以在具有靶标阵列的粘合剂涂覆的显微镜载片上实施，所述靶标的最低限度具有与组织切片共存的小鼠和家兔IgG蛋白的梯度密度阵列。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中，所有阵列靶标均为20log(稀释度)曲线上的成员，并且所述稀释度的范围可以为1：1至1,000：1。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中，使用也具有20log(稀释度)曲线的来自二级蛋白系列的更大量点，同时补偿染色试剂本身的反应性变化，扩展的抗原标尺从来自20log(稀释度)曲线的三个点投射到扩展的标尺。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中，采用客观测量来使用每种抗原标尺测量所述共生组织切片中的所述相同的抗原密度。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中，然后将所述一级抗原浓度标尺应用于所述共生组织切片，以接近被检测到细胞缺陷例如癌症的组织切片。