[发明专利]高活性NK细胞及其应用

说明书

本发明提供细胞毒活性更高的NK细胞。本发明的课题在于提供可以期待高效果的用于NK细胞疗法的药物组合物。本发明提供具备下述(1)及(2)的特征的NK细胞或其群体：(1)CD16阳性、CD56高表达、且CD57阴性；(2)NKG2C阳性、NKG2A阴性～低表达、及CD94阳性。本发明还提供药物组合物，其包含这样的NK细胞的群体、及治疗上有效量的抗体。

技术领域

本发明涉及具有高细胞毒活性的自然杀伤细胞(NK细胞)及其应用。

背景技术

自然杀伤细胞(NK细胞)为作为自然免疫的主要因子工作的细胞毒性的淋巴细胞。已知人外周血NK细胞为CD16阳性，以低水平表达CD56，和CD57阳性(非专利文献1、2)。

作为基于NK细胞细胞毒性的机制之一，已知抗体依赖性细胞毒性(Antibodydependent cellular cytotoxicity，ADCC)。NK细胞在其细胞表面上具有Fc受体(CD16)，而ADCC为NK细胞经由Fc受体与结合在靶标细胞的抗体进行结合，进行靶标细胞伤害的机制。

NK细胞在肿瘤细胞、病毒感染细胞的排斥中是重要的。将从患者自身提取的NK细胞，通过体外的培养使其增殖几百倍～数千倍，使其活化，输回患者的NK细胞疗法，作为副作用比较少的治疗方法而受到关注。通常，从正常的成人的外周血进行1次单采血液成分术(apheresis)可以回收约1×10¹⁰个单核细胞，如果使外周血单核细胞中的NK细胞的构成比率为约7％，则可得到7×10⁸个的NK细胞。另一方面，如果设患者的体重为60kg，则也就是说需要6×10⁶个～4.8×10⁹个NK细胞。为此，推进了将从供体得到的NK细胞进行培养扩增，而得到对使靶标细胞被杀灭而言足够的NK细胞的技术的开发。例如，专利文献1提出了NK细胞的扩增方法，其特征在于包括：制备包含NK细胞的细胞群体的步骤，和从包含NK细胞的细胞群体中除去T细胞的步骤，和对进行除去后剩余的细胞利用作为细胞因子仅包含2500IU/mL至2813IU/mL的IL-2的培养基，而不使用饲养层细胞而进行培养的步骤。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2013-27385号公报(日本专利第5572863号)

非专利文献

非专利文献1：Lorenzo，M.，Blood，116：3689(2010)

非专利文献2：有马靖佳，日本造血细胞移植学会杂志，第3卷，第1号：12(2014)

发明内容

发明所要解决的问题

基于本发明人等的研究，则从外周血得到的初代NK细胞为CD16高表达，但在将NK细胞作为效应细胞(E)、K562细胞作为靶标细胞(T)而以混合比(E∶T)1∶1进行共培养的情况下，细胞毒活性为10～20％左右。希望获得细胞毒活性更高的NK细胞。

另外，对众多抗体药物而言，基于NK细胞的ADCC活性为其作用机制之一。为了NK细胞发挥ADCC活性，需要存在于NK细胞表面的CD16抗体与能诱导抗体依赖性细胞毒性的抗体进行结合。然而，至今仍没有对于关于将抗体药物和NK细胞疗法有效地组合的报告。

解决问题的方法

[1]本发明提供以下内容：

NK细胞或其群体，其具备下述(1)及(2)的特征：

(1)CD16阳性、CD56高表达、且CD57阴性；

(2)NKG2C阳性、NKG2A阴性～低表达、及CD94阳性。