[发明专利]用于电介质校准的含有C2CL核酸内切酶的组合物以及使用其进行电介质校准的方法

说明书

提供一种使用C2c1核酸内切酶的电介质校准技术。所述电介质校准技术的特点是尤其适用于真核细胞，例如，适用于哺乳动物细胞。

技术领域

本公开涉及使用C2c1核酸内切酶的基因组编辑技术，并且尤其涉及包括C2c1核酸内切酶和向导RNA的基因组编辑组合物以及使用其的基因组编辑方法。

背景技术

发现于细菌和古生菌中的CRISPR-Cas系统是一种保护机制，其赋予对遗传元件的抗性。CRISPR-Cas系统的特点是通过使用能够与外源DNA或者RNA互补结合的向导RNA和用作核酸酶的Cas效应蛋白来识别和切割DNA或者RNA的特定靶序列。由于该特点，近年来，所述系统已经用作能够编辑高等生物的基因的基因编辑技术，并且因此在基础和应用科学领域具有非常广泛的应用。

最广泛使用的CRISPR基因编辑技术基于发现于酿脓链球菌(Streptococcuspyogenes)中的2型CRISPR-Cas9系统。来源于S.pyogenes的CRISPR-Cas9系统在高效地在所需靶位点诱导基因编辑的能力的意义上普遍是有效的，但是是在其靶序列需要5'-NGG PAM序列存在的限制内。作为克服该限制的策略中的一个，对利用新颖的CRISPR-Cas系统或者来自不同物种的其他类型的基因编辑系统的可行性已经进行了大量的研究。

发明内容

技术问题

一方面提供一种基因组编辑组合物，所述基因组编辑组合物包括C2c1-CRISPR系统、编码该C2c1-CRISPR系统的基因(DNA(cDNA、rDNA等)或者RNA(mRNA等))、或者携带所述基因的表达载体。

另一方面提供一种基因组编辑方法，所述基因组编辑方法包括将所述基因组编辑组合物引入细胞中或者生物体中的步骤。

另一方面提供一种使用所述基因组编辑组合物所获得的经基因修饰的细胞。

另一方面提供一种使用所述经基因修饰的细胞所获得的经基因修饰的生物体。

另一方面提供一种用于生产转基因动物的方法，所述方法包括将哺乳类动物的胚胎移植至哺乳类动物的寄养母体的输卵管中的步骤，所述哺乳类动物的胚胎具有引入其中的所述基因组编辑组合物。

技术方案

C2c1-CRISPR系统是最近发现的VB型的CRISPR-Cas系统。与通常利用率最高的SpCas9系统不同，C2c1-CRISPR系统的特点是含有作为用作核酸酶的效应蛋白的C2c1蛋白而非Cas9，识别5'-TTN PAM序列而非NGG-3'PAM序列，并且在DNA切割时形成黏性末端而非平端。

本说明书中提出了一种将C2c1核酸内切酶应用于真核细胞(例如人细胞)中的基因编辑的技术。

一方面提供一种基因组编辑组合物，所述基因组编辑组合物包括C2c1-CRISPR系统，编码该C2c1-CRISPR系统的基因(DNA(cDNA、rDNA等)或者RNA(mRNA等))，或者携带所述基因的表达载体。

C2c1-CRISPR系统可以包括C2c1蛋白(例如，AacC2c1蛋白)和能够与靶基因的靶位点杂交(具有与靶基因的靶位点互补的核苷酸序列)的向导RNA(例如，单向导RNA(single-guide RNA，sgRNA))。

相应地，基因组编辑组合物可以包括：(1)C2c1核酸内切酶，编码C2c1核酸内切酶的基因，或者携带所述基因的表达载体；和(2)向导RNA，编码向导RNA的DNA，或者携带所述DNA的表达载体。

另一方面提供一种基因组编辑方法，所述基因组编辑方法包括将所述基因组编辑组合物引入(给药或者注射)至细胞中或者生物体中的步骤。所述细胞可以是从活生物体分离出来的细胞(例如，真核细胞)，并且所述生物体可以是包括或者不包括人的真核生物体(例如，哺乳动物)。