[发明专利]质量导向分离

说明书

本发明涉及自动化质量导向分离来自样品的两种或更多种组分的方法，所述方法包括：通过改变组成来确定溶剂梯度；通过使所述溶剂梯度进行质谱法(MS)，以产生梯度信号；使包含至少一部分所确定的梯度的梯度流经已经施加了样品的填充的色谱柱；使从所述柱流出的洗脱液进行MS，以产生样品信号；通过在所选的m/z值范围内从样品信号中减去梯度信号来产生谱图；基于所产生的谱图，引导级分收集器收集包含分离组分的每一个级分。

技术领域

本发明涉及分离领域，例如液相色谱法。更具体而言，本发明涉及有效分离液体或固体样品的组分的质量导向方法；自动化的这种方法和能够执行该方法的计算机；以及用于质量导向分离液体或固体样品的组分的系统。

背景技术

许多诊断和制备方法包括针对由例如从经受测试的受试者中获得的液体样品(例如血液或尿液样品)或从合成和/或制造过程中获得的液体样品，进行有机分子的检测。液相色谱法对于任何制备或诊断分离而言，是公知且应用广泛的方法。

快速色谱法是一种已经使用了数十年的色谱技术，它使用填充有不溶性固体载体的(称为固定相)柱或筒和洗脱溶剂混合物(称为流动相)来分离和纯化有机化合物的混合物。固定相和流动相通常具有非常不同的极性，其同时起作用以分离化合物混合物。

众所周知地，在快速色谱法中使用各种非破坏性检测器(例如UV检测器)和/或破坏性质量检测器(例如蒸发光散射检测器(ELSD)或质谱仪(MS))，以检测经过分离的在流动相中的分子，并指导自动级分收集器根据来自检测器的信号将经过分离的分子收集在单独的小瓶中。

分离的有机化合物可以在各种应用(例如合成)中找到后续用途，或用作最终产品。

当质谱仪用作自动快速色谱法中的检测器时，通常产生总离子流(TIC)色谱图，并且其表示在分析中的每个点处检测到的整个质量范围内的总强度。或者，产生提取的离子色谱图(XIC，有时表示为EIC)，其中从用于色谱运行的整个数据集中找回表示一种或多种目标分析物的一个或多个m/z值。在这种XIC(EIC)分析中的每个点处绘制特定分析物的m/z值左右的质量公差窗口内的总强度或基峰强度。

但是，在复杂样品中，在所得色谱图中个别物质的信息可能会被主要由溶剂引起的背景噪声所掩盖。因此，在该领域中需要提供新的具有改善的分辨率的方法。

在常规的质量导向快速色谱法中，通常在真正的分离之前进行准备步骤，以鉴定各个目标物质的质量。但是，这是一个需要大量人力且耗时的步骤。

US 2014/0312216(Advion Inc.)涉及质量导向的级分收集的信号处理，并且更具体地涉及从质谱仪信号中去除噪声的方法，以便改进从色谱柱中洗脱液的级分的收集。该方法被描述为广泛地适用于任何形式的液相色谱法，例如反相色谱法、正相快速色谱法和超临界流体色谱法。该专利申请还记载了一种用于进行级分收集的系统，其中通过质谱法分析来自色谱柱的洗脱液而获得原始信号；基于所述原始信号计算基线信号；并且通过从原始信号中减去基线信号来生成经加工的信号，其将用于后续的级分收集中。因此，所记载的降噪是通过以下方式实现的：对于来自色谱柱的洗脱液进行分析，并且之后直接进行对于分析物的真正的色谱分离，即在相同的色谱运行中。因此，建议将所提出的这种方法用于等度洗脱，并且这种方法在梯度色谱法中似乎是不可行的。此外，由于该方法预先假定在纯溶剂上完成降噪计算，因此重要的是要清楚地意识到分析物何时突破到洗脱液中。因此，US2014/0312216中提出的方法可能难以成功应用于小规模色谱柱中。

发明内容

本发明涉及质量导向分离两种或更多种组分的方法，其可以提供改善的分辨率并因此改善级分收集。

更具体而言，本发明可以基本上减少或甚至消除通常由于溶剂效应而引起的基线漂移所产生的噪声。