[发明专利]可溶性PSGL-1蛋白质变体的纯化方法

权利要求书

1.纯化目标可溶性蛋白质的方法，所述蛋白质在N-末端包含P-选择素糖蛋白配体-1(PSGL-1 GenBank登录号Q14242.1)的成熟胞外结构域，所述方法包括将包含所述目标可溶性蛋白质的混合物按以下所示顺序进行：

a)强阴离子交换(AE)固相层析，

b)疏水相互作用(HI)固相层析，和

c)羟基磷灰石(HA)固相层析。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述强阴离子交换层析包括将包含目标可溶性蛋白质的混合物与选自Tris、Tricine、三乙醇胺、HEPES、TES、MOPS和磷酸盐的缓冲液组合上样到强阴离子交换固相上。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述缓冲液是浓度低于30mM且pH为6.5至8的Tris或磷酸盐。

4.根据权利要求2-3中任一项所述的方法，还包括用NaCl或KCl盐水溶液在等度洗脱或通过将盐水溶液的浓度增加至1M的正梯度洗脱下而将目标蛋白质从所述强阴离子交换固相上洗脱下来。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述疏水相互作用固相是苯基疏水固相。

6.根据权利要求4-5中任一项所述的方法，其中将包含从AE洗脱的目标可溶性蛋白质的混合物上样到在包含高盐浓度的上样缓冲液中的疏水相互作用固相层析上，其中盐选自：NaCl、硫酸铵和硫酸钾。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述缓冲液是浓度低于100mM的Tris，盐是NaCl。

8.根据权利要求7所述的方法，其中在所述Tris缓冲液中，NaCl浓度高于3.5M。

9.根据权利要求5-8中任一项所述的方法，还包括通过应用缓冲溶液将目标蛋白质从疏水相互作用(HI)固相层析中洗脱下来，其中所述NaCl盐浓度低于2.5M。

10.根据权利要求9所述的方法，其中将包含从HI洗脱的可溶性目标蛋白质的混合物引入到浓度低于15mM且pH为6.5至8的缓冲液中，并上样到HA柱上。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述缓冲液选自pH为6.6至7.4的Tris和磷酸盐。

12.根据权利要求10-11中任一项所述的方法，其中所述缓冲液是磷酸盐且其包含浓度低于0.5mM、优选约0.3mM的CaCl₂。

13.根据权利要求10-11中任一项所述的方法，其中所述缓冲液是Tris且其包含MgCl₂。

14.根据权利要求13所述的方法，其中MgCl₂的浓度低于1.5mM，优选为1.2mM。

15.根据权利要求10-14中任一项所述的方法，其中通过稀释或渗滤达到低于15mM的合适缓冲液浓度和6.5至8的pH。

16.根据权利要求12或15所述的方法，其中在羟基磷灰石固相层析之后的流穿液中发现目标蛋白质。

17.根据权利要求13-15中任一项所述的方法，其中通过将磷酸根离子浓度增加至15mM以上而将目标蛋白质从羟基磷灰石固相上洗脱下来。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述增加是通过磷酸盐浓度梯度进行的。