[发明专利]用于肽递送的稳定乳液的制造方法

说明书

本发明涉及一种以工业规模制造即用型肽乳液的方法，所述方法包括在低剪切条件下用至少一种佐剂乳化至少两种肽的悬液的步骤。本发明还涉及可根据该方法获得的即用型乳液。本发明允许递送可称量的肽乳液，所述肽保持它们的完整性并满足药物无菌产品所需的要求。

本发明涉及以工业规模制造即用型肽乳液的方法和可根据该方法获得的即用型乳液。本发明允许递送可称量的肽乳液，所述肽保持它们的完整性并满足药物无菌产品所需的要求。

发明背景

治疗癌症正在沿用新方法，其包括开发包含肽组合的改进的癌症疫苗。

然而，不溶性肽的存在、肽聚集的风险和可能导致的免疫原性降低，是蛋白质药物或肽药物开发中反复发生的障碍。当肽在同一制剂中混合时，这种聚集或脱酰胺的风险在肽之间增加。

所有肽候选药物的大约95％在临床前或临床试验期间被舍弃，经常是由于与低溶解度或聚集问题相关的问题。聚集也是开发基于蛋白质的药物的最重要障碍之一，因为它不仅可能危害它们的生物利用度和治疗效果，还会增加不良反应的风险(基于溶剂的酸碱性质解释不溶性肽序列的溶解(Interpretation of the dissolution of insolublepeptide sequences based on the acid-base properties of the solvent)LMalavolta等人2006，Protein Sci.2006Jun；15(6):1476–1488)。

短于5个残基的肽通常可溶于水或含水缓冲液，除非整个序列由疏水氨基酸(例如A、F、I、L、M、P、V、W、Y、α-氨基丁酸、β-氨基丙氨酸、正亮氨酸)组成。含有50％和更多疏水残基的肽可能不溶于或仅部分溶于水溶液中。含有高比例(75％)的D、E、H、K、N、Q、R、S、T、Y的肽能够构建分子间氢键(即交联)，从而在水溶液中形成凝胶。

肽的聚集体被分类为可溶性的或不溶性的，以及共价键合(涉及形成共价键，经常是二硫键)或氢键键合(较弱的相互作用)的。治疗性蛋白质通过共价键的自缔合通常是不可逆的，而通过较弱的相互作用形成的聚集体在蛋白质浓度、温度和pH变化时可以是可逆的。因此，聚集体的大小范围可以从微小的、不可见的、不可过滤的粒子到用肉眼可见的大的沉淀物。此外，一些聚集体可以是静态的，而其他聚集体可以是动态的。

某些制造阶段会影响化学降解的风险，其增加了物理降解的风险和聚集体形成。例如，较高浓度的蛋白质或肽制剂可以增加聚集的几率，以及溶液pH、温度、缓冲液选择的变化。此外，在疫苗制造中进行的乳化步骤也可能导致肽降解和聚集。带有佐剂的疫苗制剂允许形成油包水(W/O)乳液，通过在注射部位形成贮库诱导免疫应答，并且事实上是高度期望的。然而，当肽的组合包括可溶性和不溶性肽二者时，均化和乳化过程是个问题。这样的肽在乳液中的稳定性对于安全性和免疫原性是至关重要的，因为乳化是局部递送肽和免疫呈递的关键因素。处于可溶或不溶状态的肽二者都对温度和搅拌敏感，它们对氧化敏感，不溶性和可溶性肽的混合物在储存期间可能存在交叉反应性顾虑，并且用于混合这类组合的机械力可以改变肽。

鉴于这些缺点，包含肽组合的疫苗制剂宁可临时制备。