[发明专利]病毒

说明书

本发明涉及使用病毒载体将转基因递送至靶细胞的领域，特别是在基因治疗领域。已经鉴定出允许口服给药病毒颗粒，特别是腺病毒颗粒的组合物。

技术领域

本发明涉及口服给药携带转基因(例如治疗性蛋白质)的病毒颗粒(特别是腺病毒颗粒)用于基因治疗。本发明特别涉及通过口服给药包含携带转基因的病毒颗粒的产品将所述转基因递送至靶细胞的方法。本发明还提供了适于对患者进行口服给药的胶囊和片剂，其已经包装了包含病毒颗粒的药物组合物。本发明进一步提供了制备用于对患者进行口服给药的病毒颗粒的方法。

背景技术

病毒载体通常用于基因治疗，也可用作疫苗以表达外源抗原。与其他类型的病毒载体相比，腺病毒载体具有许多优点。例如，腺病毒被很好地研究，可以生长成高滴度的稳定储液，能够有效地转导分裂和非分裂细胞并且能够保持大片段的DNA。现在已经使用腺病毒载体进行了大量基因治疗试验，其中许多涉及癌症的治疗。其他一些研究使用腺病毒表达治疗性蛋白质以纠正遗传缺陷。几乎所有这些临床试验都表明腺病毒载体是安全的并且耐受良好。

大多数腺病毒载体是修饰形式的Ad5(血清型5)，并且载体可以是复制型的或非复制型的。非复制型载体通常缺失必需的E1A和E1B基因，并被具有高启动子活性的表达盒取代，以驱动外源转基因的表达。许多非复制型载体也缺乏E3和E4区域。另一种非复制型腺病毒载体是“辅助依赖性”载体，其大部分基因组缺失但保留了复制起点以及用于包装成病毒所需的约500个碱基对。这些载体在复制型辅助腺病毒的存在下构建和繁殖，所述辅助腺病毒提供所需的早期和晚期蛋白质。辅助腺病毒通常在基因组中包装信号的侧翼有loxP位点。用于产生载体的细胞系有条件地表达Cre重组酶，其中所述Cre重组酶从辅助腺病毒基因组中切除包装信号侧翼的loxP，因此允许优先包装辅助依赖性腺病毒基因组(参见例如McConnell和Imperiale(2004)Human Gene Therapy,1022-1033，和Vorburger和Hunt(2002)The Oncologist,7,46-59)。

当表达囊性纤维化跨膜调控因子时，通过例如鼻内地或通过支气管内导管给药非复制型腺病毒载体，当表达血管内皮生长因子时，通过例如经心肌内或骨骼肌注射给药非复制型腺病毒载体，并且当表达胞嘧啶脱氨酶时，通过例如肿瘤内注射给药非复制型腺病毒载体。

发明内容

本发明人惊奇地发现，腺病毒颗粒可以口服给药。特别地，本发明人已经显示，在葡萄糖依赖性促胰岛素多肽启动子控制下，携带胰岛素的腺病毒颗粒能够在口服给药时降低糖尿病大鼠的葡萄糖水平。不仅腺病毒颗粒成功地递送到肠道，而且令人惊讶的是，颗粒进入细胞并允许治疗性蛋白质表达。发现治疗性蛋白质在外周循环中是可检测的。

因此，本发明提供了将转基因递送至患者体内靶细胞的方法，所述方法包括口服给药包含病毒颗粒的产品，所述病毒颗粒携带转基因。

本发明还提供用于对患者进行口服给药的片剂或胶囊，其包含药物组合物，所述药物组合物包含携带转基因的病毒颗粒。

此外，本发明提供了制备用于对患者进行口服给药的携带转基因的病毒颗粒的方法，所述方法包括：

(a)培养和纯化携带所述转基因的病毒颗粒；

(b)将所述病毒颗粒配制成药物组合物；

(c)可选的干燥所述药物组合物；和

(d)将所述药物组合物包装成片剂或胶囊，用于对患者进行口服给药。

附图说明