[发明专利]一种放射性结直肠炎动物模型的建立方法

说明书

本发明提供了一种放射性结直肠炎动物模型的建立方法，包括将小鼠随机分成两个大组；正常喂养1‑2周，让小鼠适应新的生活环境；模拟照射时小鼠的体位，取平均值；制定放射治疗计划；依据分组设计不同，采用不同剂量梯度射线单次大剂量照射；评估结直肠组织病变严重程度。本发明结合临床实际，采用医用直线加速器常用治疗射线(6MV X射线)能更好的模拟出临床放疗副反应的放射性结直肠损伤病变过程且动物死亡率低，简便易重复，为研究放射性结直肠损伤提供了实验基础，方便进一步研究放射性结直肠损伤机制及指导临床用药，更贴近临床实际，更有利于放射性肠炎的病程机制研究及药物开发研究，并可进一步拓展应用于放射性肠炎的防治技术的使用。

技术领域

本发明涉及动物模型类生物医学的技术领域，尤其涉及一种放射性结直肠炎动物模型的建立方法。

背景技术

随着医疗技术水平的不断提升，放射治疗在肿瘤的综合治疗中的作用日益突出，约70％的癌症患者在治疗癌症的过程中需要用放射治疗，放射治疗已成为治疗恶性肿瘤的主要手段之一。随着新辅助放化疗带来明显的生存获益的同时，结直肠癌幸存者也越来越多，放射性结直肠炎患者早已超过溃疡性结肠炎和克罗恩病的患者之和。放射性结直肠炎是结直肠癌新辅助放疗后常见的肠道并发症，尽管随着放疗技术的不断提升，正常组织的受照射剂量已经得到了很好的控制，但正常的组织辐射毒性仍然是癌症治疗的最大障碍。早期放射肠病发生在放射治疗3个月内，并影响患者治疗时的生活质量。此外，由于放射性结直肠炎的发生还可能会导致治疗中断或改变原治疗方案，因此影响肿瘤控制的可能性。迟发放射性肠炎更是癌症长期存活者的一个非常重要的问题。放射性肠病早期肠黏膜细胞更新受到抑制，以后小动脉壁肿胀、闭塞，引起肠壁缺血，黏膜糜烂。晚期肠壁引起纤维化，肠腔狭窄或穿孔，腹腔内形成脓肿、瘘道和肠粘连等。因此，迫切需要对放射性肠病的细胞和分子机制进行探索及开展放射性肠病防治相关工作。在现有技术中，还没有出现小鼠放射性结直肠炎的建立方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的主要目的在于提供一种放射性结直肠炎动物模型的建立方法，以解决当前研究放射性肠病没有可靠、合理、贴近临床的动物研究模型的问题。

本发明提供的放射性结直肠炎动物模型的建立方法，包括以下步骤：

S10、将小鼠随机分成两个大组；

S20、正常喂养1-2周，让小鼠适应新的生活环境；

S30、待小鼠长至6-7W后，取3只小鼠处死后，模拟照射时小鼠的体位，计算仰卧位、四肢固定状态下，小鼠结直肠部位到脊柱的深度，取平均值；

S40、制定放射治疗计划；

S50、待小鼠长至6-7W后，称量体重，依次麻醉后固定四肢，按照上述步骤S40的放射治疗计划，用医用直线加速器6MV X射线，依据分组设计不同，采用不同剂量梯度射线单次大剂量照射；

S60、分别放回各自的鼠笼中正常喂养，照射后7天内为小鼠急性放射性结直肠炎时期，期间密切观察小鼠的观察指标，直至喂养至照射后第7天，将小鼠安乐死后，取下小鼠结直肠组织，4％多聚甲醛固定后，常规脱水包埋、切片后进行HE染色、天狼猩红染色，评估结直肠组织病变严重程度；

S70、对于慢性放射性结直肠炎组，在小鼠度过急性放射性结直肠炎后，每5天观察小鼠的观察指标，直至喂养至照射后第6周，将小鼠安乐死后，取下小鼠结直肠组织，4％多聚甲醛固定后，常规脱水包埋、切片后进行HE染色、天狼猩红染色，评估结直肠组织病变严重程度。

优选的，在步骤S10中，所述小鼠为4-5W的C57BL/6雄性小鼠；分组情况如下：急性放射性结直肠炎组：0Gy、12Gy、18Gy、22Gy；慢性放射性结直肠炎组：0Gy、12Gy、18Gy，每个剂量组5-7只小鼠，每组小鼠用特定的鼠笼及水瓶，分开喂养。