[发明专利]一种用于异育银鲫免疫增强的改性壳聚糖的制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种用于异育银鲫免疫增强的改性壳聚糖的制备方法及应用，包括如下步骤：（1）称取壳聚糖，溶于乙酸溶液，调节pH值至4~5之间；（2）按照摩尔比1：0.8~1.2加入半胱氨酸，搅拌均匀，升温至35~45℃，反应2~4 h，冷却至室温，静置，得悬浊液；（3）按摩尔比1：1.2~2.0称取三甲基氯化铵，溶于乙醇和乙酸的混合溶液中，搅拌均匀，加入步骤（2）所得悬浊液，60~80℃反应5~8h，反应结束后冷却至室温，过滤，洗涤干净，50~70℃真空干燥，即得；得到的改性壳聚糖作为异育银鲫免疫增强剂的应用。本发明所得改性壳聚糖能明显促进异育银鲫的生长，显著提高异育银鲫的免疫力和抗病力。

技术领域

本发明属于水产养殖技术领域，具体涉及一种用于异育银鲫免疫增强的改性壳聚糖的制备方法及应用。

背景技术

异育银鲫是利用天然雌核发育的方正银鲫为母本，以兴国红鲤为父本，经人工授精繁育的子代，具有良好的杂种优势，增产效果明显，且肉质细嫩，营养丰富，并且离水存活时间长，食性广，容易饲养，适应性强，成活率高，是我们长江中下游地区淡水养殖中主要养殖或混养的经济鱼类。但近年来，随着塘养殖周期的增加以及异育银鲫品种的退化，异育银鲫频繁爆发锚头鳋、孢子虫、烂鳃病等疾病，给养殖业带来较大的经济损失。

为提高异育银鲫免疫活性，养殖业通常会将免疫增强剂添加到饲料中复配使用。免疫增强剂时指具有促进或诱发宿主防御反应，增强生物体抗病能力的一类物质，主要作用于水生无脊椎动物的非特异性免疫系统，激活机体自身的免疫机能从而达到防御效果，增强其抗病力。与抗生素和疫苗相比，免疫增强剂具有安全，无残留，作用范围广和使用方便等优点。酵母多糖是水产养殖中常用的免疫增强剂，但也存在对异育银鲫免疫力和抗病力提高不显著等缺点。

壳聚糖又称几丁聚糖，是迄今所发现的唯一天然碱性多糖。壳聚糖对生物体是相对安全的，且可生物降解，具有生物相容性。现有技术中已见到壳聚糖在水产养殖领域的应用，但有很多仍处于实验室阶段，这便要求研究者继续利用各种方法和技术对壳聚糖进行改进和拓展。

发明内容

针对现有问题的不足，本发明的第一个目的是提供一种用于异育银鲫免疫增强的改性壳聚糖的制备方法，所得改性壳聚糖能明显促进异育银鲫的生长，显著提高异育银鲫的免疫力和抗病力。

第二个目的是提供一种用于异育银鲫免疫增强的改性壳聚糖的应用。

本发明解决其技术问题采用的技术方案是：

一种用于异育银鲫免疫活性增强的改性壳聚糖的制备方法，包括如下具体步骤：

(1)称取壳聚糖，溶于乙酸溶液，调节pH值至4～5之间；

(2)按照摩尔比1：0.8～1.2加入半胱氨酸，搅拌均匀，升温至35～45℃，反应2～4h，冷却至室温，静置，得悬浊液；

(3)按摩尔比1：1.2～2.0称取三甲基氯化铵，溶于乙醇和乙酸的混合溶液中，搅拌均匀，加入步骤(2)所得悬浊液，60～80℃反应5～8h，反应结束后冷却至室温，过滤，洗涤干净，50～70℃真空干燥，即得。

作为本申请的优选技术方案，所述步骤(1)中，乙酸的浓度为0.01mol/L。

作为本申请的优选技术方案，所述步骤(2)中，静置的时间为8～12h。

作为本申请的优选技术方案，所述步骤(3)中乙醇和乙醇的体积比为3：4。

作为本申请的优选技术方案，所述步骤(3)中，洗涤采用的有机溶剂和去离子水交叉洗涤的方式。

作为本申请的优选技术方案，所述步骤(3)中洗涤采用的有机溶剂为乙醇、甲醇或者丙酮中的一种或多种。

上述异育银鲫免疫增强的改性壳聚糖的制备方法制备得到的改性壳聚糖。