[发明专利]一种血小板衍生生长因子PDGF-BB的胶体金核酸适配体试纸条及其制备方法

说明书

本发明公开了一种血小板衍生生长因子PDGF‑BB的胶体金核酸适配体试纸条及其制备方法。所述的胶体金核酸适配体试纸条包括底板，所述的底板上依次粘贴有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，两相邻粘贴物之间部分重叠，所述的硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，所述的结合垫上包被有胶体金标记的Apt1‑Poly T，所述的检测线上包被有PDGF‑BB的核酸适配体Apt2，所述的质控线上包被有3’端标记有生物素的Poly A。本发明的胶体金核酸适配体试纸条的快速、简便、准确、低成本的优势将会促进该种检测方法的推广应用，为药物研究和筛选提供一种新的方法和思路。

技术领域：

本发明属于检测技术领域，具体涉及一种血小板衍生生长因子PDGF-BB的胶体金核酸适配体试纸条及其制备方法。

背景技术：

血小板衍生生长因子(PDGF)是一种人血小板中的生长因子蛋白，具有PDGF-AA、PDGF-BB、PDGF-AB、PDGF-CC和PDGF-DD五种不同形式的二聚体类型。其中，PDGF-BB是血清中重要的细胞因子，是用于癌症诊断和直接参与许多细胞转化过程的蛋白质标志物。PDGF-BB与许多恶性的疾病相关，如，动脉粥样硬化、纤维化。其常在人类恶性肿瘤细胞中过度表达。因此，PDGF-BB的定性和定量检测在生物和医学领域中至关重要。现在常用的方法用于PDGF的检测方法有：酶联免疫吸附测定法、荧光免疫分析和化学发光免疫分析等。

目前常用的用于PDGF的检测方法有：酶联免疫吸附测定法、荧光免疫分析和化学发光免疫分析等。与酶联免疫技术中应用的显色酶或荧光素、放射免疫技术中应用的同位素、血清学中应用的荧光素相比，胶体金拥有以下优点：结果肉眼可见，无需复杂、昂贵的仪器，可用于现场快速诊断；环境友好型，无任何放射污染，无毒无害；结果可长期保存；需时短，可用于快速诊断。

发明内容：

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种血小板衍生生长因子PDGF-BB的胶体金核酸适配体试纸条及其制备方法。

本发明的第一个目的是提供一种血小板衍生生长因子PDGF-BB的胶体金核酸适配体试纸条，包括底板，所述的底板上依次粘贴有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，两相邻粘贴物之间部分重叠，所述的硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，所述的结合垫上包被有胶体金标记的Apt1-Poly T，所述的Apt1-Poly T为3’端加有Poly T的PDGF-BB的核酸适配体Apt1，所述的检测线上包被有PDGF-BB的核酸适配体Apt2，所述的质控线上包被有3’端标记有生物素的Poly A。

优选，所述的Apt1-Poly T的核苷酸序列为：5’-AGGGCGCGTTCTTCGTGGTTACTTTTAGTCCCGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-3’(如SEQ ID NO.1所示)；所述的PDGF-BB的核酸适配体Apt2的核苷酸序列为：5’-CAGGCTACGGCACGTAGAGCATCACCATGATCCTG-3’(如SEQ ID NO.2所示)；所述的Poly A的核苷酸序列为：5’-AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA-3’(如SEQ ID NO.3所示)。

所述的底板优选为PVC底板。

所述的检测线和质控线之间的距离优选为3mm。

本发明的第二个目的是提供一种所述的血小板衍生生长因子PDGF-BB的胶体金核酸适配体试纸条的制备方法，包括以下步骤：

1)样品垫的制备：将玻璃纤维膜浸泡在样品垫处理液中，取出干燥，制备得到样品垫；

2)结合垫的制备：用胶体金标记5’端修饰有巯基的Apt1-Poly T，得到胶体金标记的Apt1-Poly T，经封闭、老化后喷到玻璃纤维膜上，干燥，制备得到结合垫；