[发明专利]一种卵黄抗体的脱脂方法

说明书

本发明公开了一种卵黄抗体的脱脂方法，属于体外诊断试剂抗体原料领域。本发明收集合格的鸡蛋卵黄，对鸡蛋卵黄稀释及酸化脱脂后，再通过加入气相二氧化硅对酸化卵黄液进行彻底脱脂，使用这种方法脱脂程度完全，卵黄抗体品质高，适合工业大规模生产，本发明具有方法简单，易于操作，工艺程序简单，产品安全性高，不会造成环境化学试剂污染。

技术领域

本发明涉及体外诊断试剂抗体原料领域，特别是一种卵黄抗体的脱脂方法。

背景技术

鸡卵黄抗体是存在于卵黄中的免疫球蛋白，它是由母鸡血清中的免疫球蛋白转移而来。卵黄抗体可以应用于临床疾病的治疗，如鸡传染性法氏囊病、新城疫、鸭瘟、等等，在临床实践中，卵黄抗体的预防和治疗效果非常理想，同时卵黄抗体的制造工艺简单价廉，在养禽业生产中的用量很大，发挥十分重要的作用。

卵黄中35％左右的组分为脂类，实际生产应用中，卵黄抗体的纯化过程就是逐步去除脂类，最后获得高纯度的IgY的过程。在卵黄抗体应用于临床诊断试剂的应用中，对脂质残留要求极高，脱脂不完全会对后续应用产生巨大干扰，因此，脱脂程度是衡量诊断用卵黄抗体品质的重要指标。传统的脱脂方法有冻融法，聚乙二醇法，氯仿法，盐析法等，这些方法存在有的不适合工业化生产，有的对环境污染大，有的回收率低，因此需要一种方法用于适用工业化生产的经济环保卵黄抗体完全脱脂技术，去除卵黄抗体中的残留脂质。

发明内容

本发明需要解决的技术问题是去除卵黄抗体中的残留脂质，实现卵黄产品的完全脱脂。

为解决上述技术问题，本发明所采取的方案是：一种卵黄抗体的脱脂方法，具体步骤如下：

第一步：强化免疫，用临床诊断指标免疫原，按照特定程序免疫鸡，鸡所产鸡蛋蓄积特定卵黄抗体；

第二步：效价检测，对鸡蛋卵黄抗体效价检测，收集合格所产鸡蛋卵黄；

第三步：酸化，鸡蛋卵黄用纯化水稀释、酸化，脱除大部分脂质；

第四步：脱脂，用脱脂技术彻底去除残留脂质。

优选的，第一步免疫鸡的强化方法为：每间隔7～20天进行强化免疫，按照抗原与佐剂等体积混合，多点注射鸡胸肌或翼下肌肉 0.5～1.5ml，每次抗原剂量为10～1000ug/只。

优选的，第一步中所述佐剂为弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂、天然来源佐剂、油乳佐剂、细胞因子佐剂、微生物佐剂、核酸佐剂、纳米佐剂等。

优选的，第二步鸡蛋卵黄抗体效价检测方法为:鸡蛋卵黄液用 0.85％生理盐水作梯度稀释，在鸡蛋卵黄检测效价超过1：64，收集所产鸡蛋，分离鸡蛋卵黄。

优选的，第二步中梯度稀释为1:2，1:4，1:8，1:16，1:32，1:64， 1:128，1:256。

优选的，第三步鸡蛋卵黄稀释与酸化方法为：鸡蛋卵黄与纯化水为1:5～1:9进行稀释，调节pH至4.5～5.5进行酸化，充分搅拌混合均匀，4℃静置过夜，分离上清液，取上清液即为酸化卵黄液。

优选的，第四步脱脂技术为：酸化卵黄液加入质量浓度为1～20g/L 的气相二氧化硅混匀后，离心收集上清液，取上清液即为完全脱脂卵黄抗体液。

优选的，第三步或第四步中离心条件为在2～8℃，10000g，30 分钟。

本发明的有益效果是在卵黄抗体纯化工艺中，以简单便捷环保的方式实现了物料的完全脱脂，实用性好；完全脱脂的物料对卵黄抗体后续纯化工艺带来便捷，减轻了后续处理工艺难度和处理通量，同时降低了后续处理的耗材成本，经济性高；解决了卵黄抗体应用于体外试剂诊断原料时，由于脱脂不完全对胶乳交联和生化比浊干扰的问题，符合应用要求。

具体实施方式