[发明专利]一种苏木素染色液及配制方法

说明书

本发明涉及一种生物医学试剂领域，特别涉及一种苏木素染色液及配制方法。本发明配方用量合理，染色效果理想。本发明提供的苏木素染色液染出的组织切片细胞核着色好、组织结构清晰，经伊红复染后的组织片颜色鲜艳对比强，易观察，染色效果理想。本发明提供的苏木素染色液染色方法，简便易操作，配制过程无需加热，染色过程安全，不会污染组织片。

技术领域

本发明涉及一种生物医学试剂领域，特别涉及用于医学生物细胞及组织的一种苏木素染色液及染色方法的应用试剂。

背景技术

苏木素染色法应用于生物学染色已有100多年历史,是组织化学和免疫组织化学中最常用的染色方法之一,广泛用于组织切片或培养细胞的染色，以及与免疫组织化学、免疫细胞化学、免疫荧光、原位杂交等配合使用。苏木素染色液主要用于显示各种组织正常成分和病变的一般形态结构，进行全面观察。苏木素染色是生物学、组织学、病理学及细胞学等学科必不可少的最基本的染色方法。在病理诊断、教学与科研中广泛应用，具有重要价值。如常用的Hat.ris氏配制法,其配方如下:A液:苏木素1g.无水乙醇10ml,B液:明矾20g。蒸溜水200ml,二液混合后煮沸再加氧化汞0.5g；隔日过滤后加2％～5％冰乙酸。其配制方法为先将苏木素溶于无水乙醇中，备用。把明矾放入蒸馏水，加热溶解，再加入备用的苏木素，煮沸2分钟，先加入少量的氧化汞，防止氧化过程中苏木素外溢，玻棒搅拌，然后，边搅拌边加入氧化汞。加完后，立即移至冰水中，加速其冷却，静置一夜后，过滤。以2％～5％的比例加入冰醋酸。室温不同，氧化的时间也不同，一般需要三个月左右，用前过滤加冰醋酸。每次过滤染液均有一定量的明矾析出,且在加冰乙酸时常发生乳白色絮状物出现。

细胞中的细胞核是由酸性物质组成，它与碱性染料(苏木素)的亲和力较强，因此，细胞或组织切片经苏木素染色液染色后，细胞核被苏木素染成鲜明的蓝紫色。几乎所有的常规切片、冷冻切片、涂片以及免疫组化后的复染均使用这种染液，它有很多优点，但也有不尽人意的地方，如使用期短，染片量多时约一个月就得更换一次；氧化结晶多，每次使用必须过滤，否则有一种发光的结晶物沉淀在切片上，推测这种物质可能是氧化汞在氧化过程中的产物。另外，配制过程较复杂，且氧化汞有一定的毒害性。在配制中存在如下四个问题：一是需火源煮沸，二是使用的氧化剂为氧化汞，易造成环境污染及对人体健康产生不良影响，三是配制过程较复杂不易掌握氧化程度，四是苏木素用量大易产生大量的氧化物漂浮于染液表面，玷污切片，不易洗净。

基于上述缺陷，本领域技术人员研究了大量的改良配方，使各种组织或细胞的一般形态、结构特点和病变的发生、发展及修复过程，在质量较佳的HE染色切片上，基本上都可以观察到。即使是要采取相应特殊染色方法一般也是在观察HE染色切片的基础上提出的。组化和免疫组化通常也要HE染色做对比。因此，如何提高HE染色质量，苏木素染液的配制方法是其关健因素。

发明内容

为弥补现有技术的不足，本发明提供一种简便易操作.易配制且配制过程不用加热，染色效果良好及操作方便快速的苏木素染色液。

本发明采用如下技术方案：一种苏木素染色液包括A液和B液。

每500mlA液(苏木素液)包括以下组成成分：

苏木素(hematoxylin)2-4.5g；

无水乙醇200ml；

碘酸钾0.10～0.36g；

钾明矾或氨明矾或Al₂(SO₄)₃·18H₂O 4.7～50g；

柠檬酸2～3ml；

亚硝酸钠1.1～2.2g；

蒸馏水 余量；

每500ml B液包括以下组成成分：

甘油70-80ml；