[发明专利]人嗜肺军团菌表面蛋白单克隆抗体及抗原捕获ELISA试剂盒

说明书

本发明公开了一种人嗜肺军团菌表面蛋白单克隆抗体及抗原捕获ELISA试剂盒。该人嗜肺军团菌表面蛋白单克隆抗体，是由保藏编号为CCTCCNO：C2017216的杂交瘤细胞株分泌产生。该人嗜肺军团菌表面蛋白单克隆抗体可用于检测人嗜肺军团菌。本发明还公开了一种基于该单克隆抗体的人嗜肺军团菌表面蛋白捕获ELISA试剂盒。

技术领域

本发明属于免疫学领域，涉及一种人嗜肺军团菌表面蛋白单克隆抗体，杂交瘤细胞株及抗原捕获ELISA试剂盒。

背景技术

军团菌是一种革兰阴性致病菌，常污染水环境，引起人呼吸道急性感染，可作为生物战剂使用。军团菌为需氧革兰阴性杆菌，无菌膜，不产酸，不产气，有一至数根端鞭毛或侧鞭毛，可运动。目前，军团菌现已发现49个种，70多个血清型，其中至少有20种与人类疾病有关。常见的有嗜肺军团菌(L.pneumophila,LP)、麦氏军团菌、博氏军团菌、菲氏军团菌、杜氏军团菌、长滩军团菌等，其中嗜肺军团菌是引起获得性肺炎的重要病原菌。该菌广泛存在于自然界水源中，还可存在于冷、热水管道系统中。在土壤、灰尘、河水、沟渠、冷却水、空调冷凝水、医院用水及呼吸机等产生的气溶胶中常可被检出，因此能以气溶胶方式传播。

由于嗜肺军团菌病暴发范围广，且对人类健康构成了严重威胁，因此越来越受到人们的关注。尽管嗜肺军团菌在全球范围内传播，但可用于实验室诊断的标准化商品试剂的种类极少。目前检测该致病微生物的方法主要以传统方法为主，即分离鉴定法，该方法所需时间长，一般要2-3天，准确率在25-75％之间，很难满足快速鉴定的需要；近几年发展起来的PCR技术，是一种快速、灵敏、特异性好的技术，但是目前该技术还是依赖于传统方法的前增菌步骤，而增菌液中往往还有PCR抑制剂，从而影响扩增的效果。同时，该技术还需要专业的检测设备，不适合进行床旁检测。以抗体为基础的免疫学检测已成为人体病原微生物检测不可或缺的重要技术手段。目前已发展了多种特异性免疫检测技术，如放射免疫分析(RIA)、酶免疫分析(EIA)、荧光免疫分析(FIA)、化学发光免疫分析(CIA)、免疫沉淀反应、免疫凝集反应、ELISA检测试剂盒、免疫胶体金试纸条、免疫乳胶检测试剂等。其中ELISA检测试剂盒、免疫胶体金试纸条等多种以抗体为基础的免疫学检测技术，以其简便、快速、灵敏、准确、实用的特点已成为病原微生物检测不可或缺的重要手段。因而，研究开发具有自主知识产权的病原微生物的抗体，是开发拥有自主知识产权的胶体金检测方法等的基础。

抗原成分的选择是制备抗体进行特异性检测的关键。PAL蛋白是嗜肺军团菌重要的外膜蛋白质之一。Engleberge等发现来源于军团菌感染病人的血清能特异识别军团菌PAL，并克隆出嗜肺军团菌相对分子质量19×10³的外膜脂蛋白基因，其中编码PAL的基因为528bp，包含176个氨基酸，该序列中存在着特征性的22个氨基酸，与肽酶Ⅱ所识别的序列一致，提示该抗原是一种脂蛋白。但对于该外膜脂蛋白在军团病致病机制中的作用尚不够清楚。序列分析表明PAL基因在各型嗜肺军团菌均具高度保守性，故PAL蛋白可以作为嗜肺军团菌的特异性诊断抗原。利用生物信息学及免疫信息学软件对PAL基因序列分析，去除与其它细菌相似性高的基因序列，使其与其它细菌抗原的交叉性降低，将进一步保证PAL蛋白的特异性，从而可利用其制备高特异性单克隆抗体。本研究选用具有种间特异性的表面蛋白PAL作为抗原，制备特异性良好的单克隆抗体，并将其应用于制备人嗜肺军团菌ELISA检测试剂盒。

发明内容

为了解决背景技术中存的上述技术问题，本发明提供了一种特异性良好以及与其他呼吸道常见病原体无交叉反应的人嗜肺军团菌表面蛋白单克隆抗体及抗原捕获ELISA试剂盒。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种产生人嗜肺军团菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述产生人嗜肺军团菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株是由中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏的保藏号是保藏编号CCTCC NO：C2017216的杂交瘤细胞株Lp-2#。