[发明专利]适用于超微量细胞核酸提取的试剂盒及方法

说明书

本发明提供了一种适用于超微量细胞核酸提取的试剂盒及方法。该方法包括采用纳米磁珠对样本进行核酸提取，其中，样本为数量少于50个的细胞。通过采用纳米磁珠对数量少于50个的细胞进行核酸提取，不仅能够实现超微量细胞核酸的提取，而且提取效率和纯度相对比较高。

技术领域

本发明涉及核酸提取试剂领域，具体而言，涉及一种适用于超微量细胞核酸提取的试剂盒及方法。

背景技术

临床及生物医学研究中常常需要从各种生物组织或细胞中抽提基因组DNA或mRNA，应用核酸扩增技术测定其成分，这是用于病症的辅助性分析和诊断的一种高度敏感，且最为直接的检测手段。所以核酸提取是生物医学研究和临床上进行基因表达水平检测、基因克隆或测序等工作之前，样品处理的必要步骤。生物样品，如培养的细胞、动植物组织、体液(如血液、分泌物、棉拭子、脓液、痰液、组织液等)、微生物样品等都需要经过适当的处理，将其中的核酸提取出来进行下一步的分析，如基因表达水平检测、基因克隆或测序等。目前常用的核酸提取试剂中都采用胍盐、表面活性剂、酚、氯仿等作为样品裂解、核酸纯化试剂；常用的操作方法有手工法、吸附柱法和磁珠法等。

转录组是指某个物种或特定细胞在某一生理功能状态下，细胞内所有转录的mRNA产物的集合，包含了时间和空间的限定，是连接基因组遗传信息与生物功能的蛋白质组的必然纽带。转录组分析包括但不限于：编码基因的分析、翻译蛋白的预测、外显子内含子的剪切拼接、转录本的机构分析功能分析，mRNA二级结构，基因的差异表达等等。目前成熟可靠的转录组分析手段包括RT-qPCR分析基因表达量、芯片杂交平台分析某些已知基因的转录活动、或者高通量测序技术等。准确深入地分析转录组，有助于全面理解细胞基因表达和调控网络的作用。

精准医疗是指以患者分子生物病理学特征，如基因组、蛋白质组或代谢组等相关内部环境信息，设计出与患者相匹配的精准医疗诊断和治疗策略。与传统的以病人临床症状和个体特征为基础的诊治方法相比，精准医疗通常能达到更好的治疗效果并且减少副作用的产生。自精准医疗提出以来，采用多种基因组技术(二代测序、RNA表达谱、拷贝数变化)和系统生物方法指导用药成为了一种全新的个性化治疗方法。这就需要对临床样本进行DNA和RNA的分离提取。

核酸提取方法种类很多，如酚、氯仿等有机溶剂抽提法、硅胶膜吸附柱法等。但由于操作过程中使用到各种有机溶剂会危害人体健康，操作步骤繁琐复杂，单位时间通量低不易实现自动化，提取出的核酸浓度纯度较低等因素为传统核酸提取技术的瓶颈。

目前对于临床珍贵的组织样本、穿刺样本或法医取证的少量样本DNA、RNA共提取的方法依然是将细胞裂解液分成两部分，一部分用Trizol法(即硫氰酸胍-酚-氯仿抽提法)提取RNA，一部分用酚-氯仿-异丙醇-乙酸氨法抽提或者是膜吸附柱的方法提取DNA和RNA。无论是Trizol法还是膜吸附柱法提取核酸，都是基于组织样本或者是穿刺样本，细胞数量远远超过100个。而对于临床微量细胞样本，当细胞数量只有5-20个，或细胞数量小于50个时，现有的技术方案并不适用于同时提取超微量细胞中的DNA和RNA。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种适用于超微量细胞核酸提取的试剂盒及方法，以解决现有技术中难以对少于50个细胞的超微量样本进行核酸提取的问题。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种核酸提取方法，该方法包括采用纳米磁珠对样本进行核酸提取，其中，样本为数量少于50个的细胞。

进一步地，核酸为DNA和/或RNA。

进一步地，上述方法包括：对样本进行裂解，得到第一裂解液；采用RNA纳米磁珠对第一裂解液进行RNA提取，得到RNA和第二裂解液；采用DNA纳米磁珠对第二裂解液进行DNA提取，得到DNA。