[发明专利]一种口蹄疫病毒竞争ELISA检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种口蹄疫病毒抗体的竞争ELISA检测试剂盒，该试剂盒包括：单域抗体sdAb‑A；A/AKT‑Ⅲ株FMDV灭活抗原；单克隆抗体9C10，封闭液；金标二抗；和支持介质。通过将口蹄疫抗原与包被在支持介质上的特异性单域抗体结合，单克隆抗体9C10和待检血清中的抗体与抗原竞争性结合，通过金标的马抗小鼠IgG检测，在检测样品时只需要加入待检样品与单抗9C10孵育1h，即可加入金标二抗进行10min的显色，洗涤后即可度值，操作简单、诊断快速。本发明的竞争ELISA检测试剂盒检测灵敏度高，与病毒中和反应的符合率较其他商业检测试剂盒更高。

技术领域

本发明属于免疫测定法和相应的生物物质领域，具体涉及一种口蹄疫病毒抗体的检测方法及应用。

背景技术

口蹄疫(foot-and-mouth disease，FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouthdisease virus，FMDV)引起的一种感染偶蹄目动物的急性、热性、接触传染性动物疫病。FMD是国际兽医局规定的必报传染病，也被中国认定为一类传染病。口蹄疫致死率很低，但病毒可以在体内长期存活，患畜持续排毒，成为重要的传染源，会给畜牧业生产和进出口贸易造成巨大的经济损失，该病不仅严重影响畜牧业的发展，也对人类健康构成很大威胁。因此，开发研究更便捷、快速、敏感、快速诊断试剂盒变得尤为重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种口蹄疫病毒抗体的竞争ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：单域抗体sdAb-A，所述单域抗体sdAb-A序列如SEQ ID NO.1所示；A/AKT-Ⅲ株FMDV灭活抗原；单克隆抗体9C10，所述单克隆抗体9C10由分泌口蹄疫A型单克隆抗体杂交瘤细胞9C10株分泌，所述杂交瘤细胞9C10株保藏编号为CGMCC No.17081；封闭液；金标二抗；支持介质。

本发明通过特定的单域抗体sdAb-A和单克隆抗体9C10使得检测的灵敏度高，与病毒中和反应的符合率较其他商业检测试剂盒更高。

本发明以口蹄疫的A型单域抗体作为包被抗体，建立一种检测口蹄疫病毒抗体的竞争ELISA检测试剂盒。由于二抗一般为多抗，因此一个一抗分子上可以结合多个二抗分子，同时一个二抗分子上可以标记多个金颗粒，所有当待检抗体为多抗时，信号经过放大，最终提高了检测的灵敏度。另外由于二抗制备比较容易，所有无需将一抗进行标记，大大缩减了工作量。为该病检验检疫提供有效实用的检测方法。

A/AKT-Ⅲ株FMDV株可商业上获得，例如可自新疆维吾尔自治区畜牧科学院兽医研究所商购。

作为本发明的一种实施方式，本发明的试剂盒中，A/AKT-Ⅲ株FMDV抗原包被浓度为1.5ug/ml，所述单域抗体sdAb-A浓度为1.5ug/ml。

作为本发明的一种实施方式，本发明的试剂盒中，所述封闭液为5％脱脂乳。

作为本发明的一种实施方式，本发明的试剂盒中，所述单克隆抗体浓度为0.375ug/ml。

作为本发明的一种实施方式，本发明的试剂盒中，所述金标二抗为金标马抗鼠多抗，金标抗体抗体浓度为0.025ug/ml。

作为本发明的一种实施方式，本发明的试剂盒中，所述支持介质为酶标板。

本发明还提供了所述口蹄疫病毒抗体的竞争ELISA检测试剂盒在非诊断目的的检测A型口蹄疫中的应用。

口蹄疫病毒抗体竞争ELISA检测，具有快速、简便、准确、稳定等特点，可用于口蹄疫的快速、批量抗体检测。

本发明还提供了所述口蹄疫病毒抗体的竞争ELISA检测试剂盒的检测方法，通过将口蹄疫A/AKT-Ⅲ株FMDV灭活抗原与包被在支持介质上的单域抗体sdAb-A结合，单克隆抗体9C10和待检血清中的抗体与抗原竞争性结合，通过金标的马抗小鼠IgG进行检测。